リパーゼを含む洗剤組成物

专利摘要:
本発明は、改善された洗剤内安定性を有する脂肪分解酵素変異体を含む洗剤組成物を提供する。改善された洗剤内安定性を伴なう脂肪分解酵素変異体は、親脂肪分解酵素内の特定のアミノ酸残基を置換することで取得される。
公开号:JP2011513539A
申请号:JP2010548853
申请日:2009-02-26
公开日:2011-04-28
发明作者:アラン、スベンセン；イェスパー、ビンド；キム、ボルク；クリスティアン、イサック、ヨルゲンセン；シャムカント、アナント、パトカー；テレサ、クレア、ヘインズ；ニール、ジョセフ、ラント；フィリップ、フランク、スーター；リセ、ムンク、ミッケルセン；ロベルト、バン、デル、ランス
申请人:ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー；
IPC主号:C11D3-386

专利说明:

[0001] 本発明は、改善された洗剤内安定性を伴なう脂肪分解酵素と、それらを調製する方法に関する。本発明は特に、サーモミセス・ラノギノサスリパーゼの脂肪分解酵素の変異体に関する。]
背景技術

[0002] 例えば、洗剤の効果の改善など、様々な工業目的で、例えばサーモミセス・ラノギノサス（同義語はヒューミコラ・ラノギノサス）から得られるリパーゼなどの菌性脂肪分解酵素を使用することが知られている。そのため、サーモミセス・ラノギノサス（同義語はヒューミコラ・ラノギノサス、欧州特許第ＥＰ２５８ ０６８号及び欧州特許第ＥＰ３０５ ２１６号）から由来するリパーゼは、洗剤用にリポラーゼ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓの製品）という商品名のもとで市販されている。国際公開特許第ＷＯ００６００６３号は、洗剤溶液で特に一回目の洗浄効果が優れているサーモミセス・ラノギノサスリパーゼの変異体について記載している。リパーゼは、衣服及びその他の布地から脂質、又は脂肪質のシミを除去するための洗剤酵素としての使用に加え、パンやその他の焼成製品の生地の添加剤、並びにパルプ及び紙の生産におけるピッチの問題の除去にも使用される。幾つかの適用においては、改善された熱安定性を伴なう脂肪分解酵素が好ましく（欧州特許第ＥＰ３７４７００号、国際公開特許第ＷＯ９２１３１３０号）、他の適用においては洗剤内安定性が好ましい。国際公開特許第ＷＯ９２／０５２４９号、同第ＷＯ９２／１９７２６号、及び同第ＷＯ９７／０７２０２号は、サーモミセス・ラノギノサス（ヒューミコラ・ラノギノサス）リパーゼの変異体を開示している。]
先行技術

[0003] 欧州特許第ＥＰ２５８ ０６８号
欧州特許第ＥＰ３０５ ２１６号
国際公開特許第ＷＯ００６００６３号
欧州特許第ＥＰ３７４７００号
国際公開特許第ＷＯ９２１３１３０号
国際公開特許第ＷＯ９２／０５２４９号
国際公開特許第ＷＯ９２／１９７２６号
国際公開特許第ＷＯ９７／０７２０２号]
課題を解決するための手段

[0004] 第１の態様では、本発明は親脂肪分解酵素の変異体を含む洗剤組成物に関し、この変異体は（ａ）親脂肪分解酵素と比較した場合、配列番号２の任意のアミノ酸２７、２１６、２２７、２３１、２３３及び２５６のいずれかに対応するアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を有し、（ｂ）所望により、親脂肪分解酵素より洗剤内安定性が高い。]
[0005] 別の態様においては、本発明は、カルボン酸エステルの加水分解、又はエステルの加水分解、合成、又はエステル交換における組成物の使用に関する。]
[0006] 更なる態様においては、本発明は洗剤内安定製剤の製造のための脂肪分解酵素変異体の使用に関する。]
図面の簡単な説明

[0007] リパーゼのアラインメント。]
[0008] 配列リスト
配列番号１は、サーモミセス・ラノギノサス（Thermomyces lanoginosus）由来のリパーゼをエンコードするＤＮＡ配列を示す。]
[0009] 配列番号２は、サーモミセス・ラノギノサス（Thermomyces lanoginosus）由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0010] 配列番号３は、アブシディア・レフレクサ（reflexa）由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0011] 配列番号４は、アブシディア・コリンビフェラ由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0012] 配列番号５は、リゾムコール・ミエヘイ（Rhizomucor miehei）由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0013] 配列番号６は、リゾプス・オリゼー由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0014] 配列番号７は、アスペルギルス・ニガー由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0015] 配列番号８は、アスペルギルス・ツビンゲンシス（tubingensis）由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0016] 配列番号９は、フザリウム・オキシスポラム（oxysporrum）由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0017] 配列番号１０は、フザリウム・ヘテロスポラム（heterosporum）由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0018] 配列番号１１は、アスペルギルス・オリゼー由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0019] 配列番号１２は、ペニシリウム・カマンベルティ由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0020] 配列番号１３は、アスペルギルス・フォエティダス由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0021] 配列番号１４は、アスペルギルス・ニガー由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0022] 配列番号１５は、アスペルギルス・オリゼー由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0023] 配列番号１６は、ランデリナ・ペニサポラ（Landerina penisapora）由来のリパーゼのアミノ酸配列を示す。]
[0024] アミノ酸修飾に関する命名法
本発明によるリパーゼ変異体について説明する際には、参照しやすくするために以下の命名法を用いる。]
[0025] 元のアミノ酸：位置：置換済みアミノ酸
この命名法に従うと、例えば、１９５位でグルタミン酸をグリシンに置換したものはＧ１９５Ｅと表示される。同じ位置でグリシンが欠失したものはＧ１９５＊と表示され、追加のアミノ酸残基、例えばリジンを挿入したものはＧ１９５ＧＫと表示される。特定のリパーゼが他のリパーゼに比べて「欠失」を含み、かかる位置に挿入が成された場合、３６位へのアスパラギン酸の挿入を＊３６Ｄと示す。]
[0026] 複数の変異はプラスにより区切られる。すなわち、Ｒ１７０Ｙ＋Ｇ１９５Ｅは、１７０位と１９５位でそれぞれアルギニンとグリシンがチロシンとグルタミン酸に置換した変異を示す。]
[0027] 記載のアラインメントの手順を適用する場合、Ｘ２３１は、位置２３１に対応する親脂肪分解酵素中のアミノ酸を示す。Ｘ２３１Ｒは、アミノ酸がＲで置換されていることを表す。配列番号２Ｘでは、ＸはＴであり、したがってＸ２３１Ｒは２３１位のＴをＲに置換したものを表す。ある位置（例えば２３１位）のアミノ酸が、アミノ酸の群、例えばＲ、Ｐ及びＹからなる群から選択される別のアミノ酸で置換されているような場合、これは、Ｘ２３１Ｒ／Ｐ／Ｙによって表されることになる。]
[0028] いずれのケースでも、ＩＵＰＡＣによる１文字又は３文字の正式なアミノ酸略称を採用する。]
[0029] 同一性：本明細書で使用される「同一性」という用語は、２つのアミノ酸配列間、又は２つのヌクレオチド配列間の関連が、「同一性」というパラメータで説明されることを意味する。]
[0030] 本発明の目的上、２つのアミノ酸配列のアラインメントは、エンボス（EMBOSS）パッケージ（http://emboss.org）バージョン２．８．０内のニードル（Needle）というプログラムを用いることによって割り出す。ニードルプログラムは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．及びＷｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４８、４４３〜４５３に記載のグローバルアラインメントアルゴリズムを実行する。用いる置換マトリクスは、ＢＬＯＳＵＭ６２、ギャップオープニングペナルティは１０、ギャップエクステンションペナルティは０．５である。]
[0031] 本発明のアミノ酸配列（「発明配列」という。例えば配列番号２のアミノ酸１〜２６９）と、異なるアミノ酸配列（「異質配列」という）の同一性の程度は、２つの配列のアライメントの完全一致数を「発明配列」の長さ又は「異質配列」の長さのうちの短い方で除した値として算出する。この結果を同一度（％）として表す。]
[0032] 完全一致は、「本配列」と「異質配列」に、同一のアミノ酸残基が重複部分の同じ位置に備わっている場合に発生する。配列の長さは、配列内のアミノ酸残基の数である（例えば、配列番号２の長さは２６９である）。]
[0033] 上記の手順は、同一性の計算に加えて相同性並びにアラインメントの計算で用いてもよい。本発明の文脈においては、相同性とアラインメントは、以下に記載されているとおりに計算される。]
[0034] 相同性とアラインメント
本発明の目的上、相同性の程度は、当該技術分野において既知のコンピュータープログラム、例えば、ＧＣＧプログラムパッケージに搭載されるＧＡＰ（Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８，Ａｕｇｕｓｔ １９９４，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ ５３７１１）（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．，（１９７０），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４８，４４３〜４５）によって適切に割り出されると思われる（ＧＡＰは、ギャップ生成ペナルティが３．０、ギャップ伸長ペナルティが０．１のギャップポリペプチド配列比較用の設定で用いる）。]
[0035] 本発明では、アブシディア・レフレクサ（reflexa）、アブシディア・コリムビフェラ、リズムコア・ミエヘイ（Rhizmucor miehei）、リゾープス・デレマ、アスペルギルス・ニガー、アスペルギルス・ツビンゲンシス（tubigensis）、フザリウム・オキシスポラム、フザリウム・ヘテロスポラム（heterosporum）、アスペルギルス・オリゼー、ペニシリウム・カマンベルディ、アスペルギルス・フォエティダス、アスペルギルス・ニガー、サーモミセス・ラノギノサス（Thermomyces lanoginosus）（別名：フミコラ・ラヌギノーサ（Humicola lanuginosa））、及びランデリナ・ペニサポラ（Landerina penisapora）のリパーゼ配列内の相当（又は相同）位は、図１に示されるアラインメントによって定義される。]
[0036] 前記アラインメントに示されていないリパーゼ配列の相同位を確認するには、当該配列を、図１に示される配列にアラインメントする。ＧＡＰプログラムによって明らかになった最も相同性の高い配列に対するＧＡＰアラインメントを用いて、その新たな配列を、図１中の本アラインメントに合わせてアライメントする。ＧＡＰは、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８，Ａｕｇｕｓｔ １９９４，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，ＵＳＡ ５３７１１）（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．，（１９７０），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４８，４４３〜４５）に掲載されている。ギャップ生成ペナルティが３．０、ギャップ伸長ペナルティが０．１のギャップポリペプチド配列比較用の以下の設定を用いる。]
[0037] 親リパーゼ（Parent lipases）
任意の好適な脂肪分解酵素を親リパーゼとも呼ばれる親リパーゼ酵素として使用することができる。幾つかの実施形態では、脂肪分解酵素は菌性脂肪分解酵素であってよい。]
[0038] 脂肪分解酵素は、カンジダ、クリベロマイセス、ピキア、サッカロマイセス、シゾサッカロマイセス、又はヤロウイアなどの属に由来する酵母脂肪分解酵素であってよく、又はより好ましくは、アクレモニウム、アスペルギルス、アウレオバシディウム、クリプトコッカス、フィロバシジウム、フサリウム、ヒューミコラ、マグナポルテ、ムコール、ミセリオフィソーラ、ネオカリマスティックス、ニューロスポラ、ペキロマイセス、ペニシリウム、ピロマイセス、シゾフィラン、タラロマイセス、サーモアスカス、チエラビア、トリポクラジウム、サーモマイセス、又はトリコデルマなどの属に由来する糸状菌性脂肪分解酵素であってよい。]
[0039] 脂肪分解酵素は更に、サッカロマイセス・カルルスベルゲンシス、サッカロマイセス・セレヴィシエ、サッカロマイセス・ディアスタティカス、サッカロマイセス・ドゥグラシィ、サッカロマイセス・クルイべリ、サッカロマイセス・ノルベンシス、又はサッカロマイセス・オビホルミス脂肪分解酵素であってよい。]
[0040] あるいは脂肪分解酵素は、アスペルギルス・アクレアタス（aculeatus）、アスペルギルス・アワモリ、アスペルギルス・フミガタス、アスペルギルス・フォエティダス、アスペルギルス・ジャポニカス、アスペルギルス・ニダランス、アスペルギルス・ニガー、アスペルギスルオリゼー、アスペルギルス・タービゲンシス（turbigensis）、フザリウム・バクトリジオイデス（bactridioides）、フザリウム・セレアリス（cerealis）、フザリウム・クルークウェレンス（crookwellense）、フザリウム・セルモラム、フザリウム・グラミネアラム、フザリウム・グラミナム（graminum）、フザリウム・ヘテロスポラム（heterosporum）、フザリウム・ネグンジ（negundi）、フザリウム・オキシスポラム、フザリウム・レティキュラタム（reticulatum）、フザリウム・ロゼウム、フザリウム・サンブシウム（sambucinum）、フザリウム・サルコクロウム（sarcochroum）、フザリウム・スポロトリキオイデス、フザリウム・サルフレウム（sulphureum）、フザリウム・トルローサム（torulosum）、フザリウム・トリコセシオイデス（trichothecioides）、フザリウム・ベネナタム（venenatum）、フミコラ・インソレンス、サーモミセス・ラノギノサス（Thermomyces lanoginosus）（別名：フミコラ・ラヌギノーズ（lanuginose））、ムコールミエヘイ（miehei）、マイセリオフソラ・サーモフィラ（Myceliophthora thermophila）、ニューロスポラ・クラッサ、ペニシリウム・パルロゼラム、トリコデルマ・ハルジアナム、トリコデルマ・コニンギ、トリコデルマ・ロンギブラキアタム（longibrachiatum）、トリコデルマ・リーセイ（reesei）、又はトリコデルマ・ビリデポリペプチド脂肪分解酵素である。]
[0041] 幾つかの実地形態においては、本発明はサーモミセスリパーゼ又はサーモミセス・ラノギノサスリパーゼである脂肪分解酵素変異体に関する。]
[0042] 幾つかの実地形態においては、本発明は脂肪分解酵素変異体に関し、変異体は、配列番号２と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は、少なくとも１００％と同一である。]
[0043] 改善された洗剤内安定性を有する脂肪分解酵素変異体の変化。]
[0044] 以下に称されている位置は、配列番号２のアミノ酸残基の位置である。「相同性とアライメント」の段落で、異なるリパーゼにおいてアミノ酸残基の対応する又は相同する位置を見つける手順が説明されている。]
[0045] 脂肪分解酵素変異体、脂肪分解変異体、要するに変異体は、発明によって、驚くべきことに、親脂肪分解酵素よりも洗剤内安定性が高いことが見出された。洗剤内安定性は、洗剤の存在下での脂肪分解／リパーゼ活性保持の質として定義される。リパーゼ活性は、完全に又は部分的に保持され得る。そのため、本発明の変異体は、それが由来した親リパーゼと比較して、洗剤の存在下でリパーゼ活性を完全に又は部分的に保持する改善された能力を示す。]
[0046] 本明細書で使用される用語「リパーゼ活性」は、カルボン酸エステル加水分解酵素活性と定義され、当該活性は、ジアシルグリセロール及びカルボキシレートの形成下で、トリアシルグリセロールの加水分解に触媒作用を及ぼす。本発明の目的上、リパーゼ活性は次の手順に基づいて決定される。リパーゼの基質は、アラビアゴムを乳化剤として使用してトリブチリン（グリセリントリブチラート）を乳化することで調製される。続いて、ｐＨスタット滴定実験装置内で、トリブチリンを３０℃、ｐＨ７又は９で加水分解する。リパーゼ活性の１単位（１ＬＵ）は、３０℃、ｐＨ７で１分間に１．０マイクロモルの酪酸を放出することの可能な酵素の量であると定義される。]
[0047] 幾つかの実施形態では、本発明の変異体は参照酵素と比較された。本明細書で使用される用語「参照酵素」又は「参照リパーゼ」は、別に明記しない限り、置換Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒを伴なう配列番号２の成熟部分を意味する。]
[0048] 幾つかの実施形態では、本発明は親脂肪分解酵素の変異体に関し、変異体は（ａ）親脂肪分解酵素と比較した場合、配列番号２の任意のアミノ酸２７、２１６、２２７、２３１、２３３及び２５６のいずれかに対応するアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を有し、（ｂ）親脂肪分解酵素より洗剤内安定性が高い。]
[0049] 幾つかの実施形態では、本発明は親脂肪分解酵素の変異体に関し、変異体は（ａ）アミノ酸残基２３１及び２３３を含み、かつ、親脂肪分解酵素と比較した場合、配列番号２の任意のアミノ酸２７、２１６、２２７、及び２５６のいずれかに対応する少なくとも１つのアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を有し、（ｂ）親脂肪分解酵素より洗剤内安定性が高い。]
[0050] 幾つかの実施形態では、本発明は親脂肪分解酵素の変異体に関し、この変異体は、位置２３１＋２３３及び（ａ）２７、（ｂ）２１６、又は（ｃ）２５６のうちの１つの位置でのアミノ酸の変化を有し、所望によりこの変異体は更に２２７を含み、位置は配列番号２に対応する。]
[0051] 幾つかの実施形態では、本発明は変異体に関するが、アミノ酸残基の置換は、配列番号２の２７Ｒ、２１６Ｐ、２２７Ｇ、２３１Ｒ、２３３Ｒ又は２５６Ｋの１つである。]
[0052] 幾つかの実施形態では、本発明は変異体に関するが、アミノ酸残基の置換は、配列番号２のＤ２７Ｒ、Ｓ２１６Ｐ、Ｌ２２７Ｇ、Ｔ２３１Ｒ、Ｎ２３３Ｒ又はＰ２５６Ｋの１つである。]
[0053] 幾つかの実施形態では、本発明は変異体に関し、変異体は（ａ）Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｐ２５６Ｋ、（ｂ）Ｌ２２７Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ、（ｃ）Ｌ２２７Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｐ２５６Ｋ、（ｄ）Ｄ２７Ｒ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ、（ｅ）Ｄ２７Ｒ＋Ｌ２２７Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ、及び（ｆ）Ｓ２１６Ｐ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒからなる群から選択される置換を含む。]
[0054] 幾つかの実地形態では、本発明は変異体に関するが、親脂肪酸酵素は、配列番号２と、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくと，も９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は少なくとも１００％同一である。]
[0055] 幾つかの実施形態では、本発明は変異体に関するが、親脂肪分解酵素は、サーモミセス・ラノギノサスＤＳＭ４１０９によって生産されたリパーゼであり、配列番号２のアミノ酸配列を有する。]
[0056] 幾つかの実施形態では、本発明は変異体に関するが、洗剤は液体洗剤内に存在する。]
[0057] 幾つかの実施形態では、本発明は脂肪分解酵素変異体を含む製剤に関する。]
[0058] 幾つかの実施形態では、本発明は製剤に関し、この製剤は液体製剤であり得る。]
[0059] ポリヌクレオチド、発現ベクター、宿主細胞、脂肪分解酵素変異体の生産。]
[0060] 幾つかの実施形態では、本発明は脂肪分解酵素変異体をエンコードする単離ポリヌクレオチドに関する。ポリヌクレオチドは、非常に低いストリンジェンシー条件下で、好ましくは低いストリンジェンシー条件下で、より好ましくは中間のストリンジェンシー条件下で、より好ましくは中の上のストリンジェンシー条件下で、さらにより好ましくは高いストリンジェンシー条件下で、最も好ましくは非常に高いストリンジェンシー条件下で、（ｉ）配列番号１のヌクレオチド１７８〜６６０と、（ｉｉ）配列番号１のヌクレオチド１７８〜６６０に含まれるｃＤＮＡ配列と、（ｉｉｉ）（ｉ）若しくは（ｉｉ）のサブシーケンスと、又は（ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、若しくは（ｉｉｉ）の相補鎖と、ハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコード化される（Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｅ．Ｆ．，ＴＭａｎｉａｔｉｓ，１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。配列番号１の部分配列は、少なくとも１００個の連続したヌクレオチド、又は好ましくは少なくとも２００個の連続したヌクレオチドを含む。更には、部分配列は、リパーゼ活性を持つポリペプチド断片をエンコードすることがある。]
[0061] 鎖長が少なくとも１００個のヌクレオチドの長いプローブでは、厳密性が非常に低い条件から非常に高い条件は、５ＸＳＳＰＥ、０．３％ＳＤＳ、２００ｕｇ／ｍＬの断片化変性サケ精子ＤＮＡ、及び厳密性が非常に低い場合と低い場合には２５％のホルムアミド、厳密性が中度である場合と中の上である場合には３５％のホルムアミド、厳密性が高い場合と非常に高い場合には５０％のホルムアミド中、４２℃でプレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを行った後に、所望により標準的なサザンブロッティング手順を１２〜２４時間、最適に行うものとして定義する。]
[0062] 鎖長が少なくとも１００個のヌクレオチドの長いプローブでは、担体物質は最後に、２ＸＳＳＣ、０．２％ＳＤＳを用いて、好ましくは少なくとも４５℃で（厳密性が非常に低い場合）、より好ましくは少なくとも５０℃で（厳密性が低い場合）、更に好ましくは少なくとも５５℃で（厳密性が中度である場合）、更に好ましくは少なくとも６０℃で（厳密性が中の上である場合）、更に好ましくは少なくとも６５℃で（厳密性が高い場合）、最も好ましくは少なくとも７０℃で（厳密性が非常に高い場合）、３回、それぞれにつき１５分間洗浄する。]
[0063] 脂肪分解酵素変異体をエンコードする単離ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチドを含む核酸作成物、核酸作成物を含む組み換え発現ベクター、及び核酸作成物又は組み換え発現ベクターを含む転換された宿主細胞は全て、当該技術分野において既知の方法で入手することができる。]
[0064] 洗剤内安定脂肪分解酵素変異体を取得する手順。]
[0065] 脂肪分解酵素の変異体は、例えば国際公開特許第ＷＯ９５２２６１５号、又は同第ＷＯ００３２７５８号に記載されている部位特異的突然変異誘発、ランダム突然変異誘発、又は局部的突然変異誘発などの当該技術分野において既知の方法で取得することができる。特定の親脂肪分解酵素の洗剤内安定変異体は、以下の標準的な手順によって取得することができる。]
[0066] 突然変異誘発（エラーが発生しやすい、ドープ型オリゴ、スパイク型オリゴ）
一次スクリーニング
より多くの洗剤内安定突然変異体の同定
メンテナンス（グリセロール培養、ＬＢ−Ａｍｐプレート、ミニプレップ）
別のアッセイプレート上でのストリーキングアウト−２次スクリーニング
（１次スクリーニングより１度高い）
ＤＮＡ配列
例えば、アスペルギルスなどの宿主細胞への形質転換
１００ｍＬスケールの中で培養、浄化、ＤＳＣ]
[0067] 幾つかの実施形態では、本発明は次のステップからなる脂肪分解酵素変異体の調製方法に関する。（ａ）核酸作成物を含む転換された宿主細胞、又はヌクレオチド酸作成物を含む組み換え発現ベクターの脂肪分解酵素変異体の生産に適した条件のもとでの培養、及び（ｂ）脂肪分解酵素変異体の回収。この方法は、当該技術分野において既知の原理に従って実施してよい。]
[0068] 幾つかの実施形態では、本発明は（ａ）親脂肪分解酵素を選択し、（ｂ）親脂肪分解酵素の中で、配列番号２の任意の２７、２１６、２２７、２３１、２３３及び２５６に対応する少なくとも１つのアミノ酸残基を置換し、（ｃ）所望により（ｂ）に記載された以外の１つ以上のアミノ酸を変化させ、（ｄ）ステップ（ａ）〜（ｃ）から生じた変異体を調製し、（ｅ）変異体の洗剤内安定性をテストし、（ｆ）より高い洗剤内安定性を有した変異体を選択し、（ｇ）選択した変異体を生産するステップ、を含む変異体の生産方法に関する。]
[0069] 使用
本発明の変異体は、親脂肪分解酵素と同様に使用することができ、その改善された洗剤内安定性により、一定の目的のためにこの変異体が好ましいことがあり得る。したがって、幾つかの実施形態では、本発明はカルボン酸エステルの加水分解、又はエステルの加水分解、合成、若しくは交換における変異体の使用に関する。]
[0070] 幾つかの実施形態では、本発明は洗剤内安定製剤の製造用のための変異体の使用に関する。]
[0071] 組成物
好ましくは、組成物は本発明の請求項で定義されているポリペプチド内で濃縮される。用語「濃縮」とは、組成物のリパーゼ活性が増加して濃縮係数が１．１になることを指す。]
[0072] 組成物は、本発明のポリペプチドを主要酵素成分、例えば、１成分組成物として含むことができる。あるいは、組成物は、アミノペプチダーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチダーゼ、カタラーゼ、セルラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリングリコシルトランスフェラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エステラーゼ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、α−グルコシダーゼ、β−グルコシダーゼ、ハロペルオキシダーゼ、インバーターゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、ペクチン分解酵素、ペプチドグルタミナーゼ、ペロキシダーゼ、フィターゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、タンパク質分解酵素、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ、又はキシラナーゼ、などの複数の酵素活性を含むことができる。さらなる酵素を、例えば次の微生物によって生産してもよい：アスペルギルス（genus Aspergillus）属に属する微生物、好ましくは、アスペルギルス・アクレアタス（Aspergillus aculeatus）、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）、アスペルギルス・フミガタス（Aspergillus fumigatus）、アスペルギルス・フォエティダス（Aspergillus foetidus）、アスペルギルス・ジャポニカス（Aspergillus japonicus）、アスペルギルス・ニダランス（Aspergillus nidulans）、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus nige）、又はアスペルギルス・オリザエ（Aspergillus oryzae）；フザリウム（Fusarium）属、好ましくはフザリウム・バクトリジオイデ（Fusarium bactridioides）、フザリウム・セレアリス（Fusarium cerealis）、フザリウム・クルックウェレンセ（Fusarium crookwellense）、フザリウム・クルモルム（Fusarium culmorum）、フザリウム・グラミネアルム（Fusarium graminearum）、フザリウム・グラミヌム（Fusarium graminum）、フザリウム・ヘテロスポルム（Fusarium heterosporum）、フザリウム・ネグンジ（F
usarium negundi）、フザリウム・オキシスポルム（Fusarium oxysporum）、フザリウム・レティキュラツム（Fusarium reticulatum）、フザリウム・ロゼウム（Fusarium roseum）、フザリウム・ザムブチヌム（Fusarium sambucinum）、フザリウム・ザルコクロウム（Fusarium sarcochroum）、フザリウム・スルフレウム（Fusarium sulphureum）、フザリウム・トルロスム（Fusarium torulosum）、フザリウム・トリコセキオイデス（Fusarium trichothecioides）、フザリウム・ベネナツム（Fusarium venenatum）；フミコラ（Humicola）属、好ましくは、フミコラ・インソレンス（Humicola insolens）若しくはフミコラ・ラノギノサ（Humicola lanoginosa）；又はトリコデルマ（Trichoderma）属、好ましくはトリコデルマ・ハルジアナム（Trichoderma harzianum）、トリコデルマ・コニンギ（Trichoderma koningii）、トリコデルマ・ロンギブラキアタム（Trichoderma longibrachiatum）、トリコデルマ・リーセイ（Trichoderma reesei）、又はトリコデルマ・ビリデ（Trichoderma viride）。]
[0073] 組成物は、当該技術分野において既知の方法に従って調製することが可能であり、液体又は乾燥組成物の形状であってもよい。例えば、ポリペプチド組成物は粒子又は微粒子の形状であり得る。組成物に含まれるポリペプチドは、当該技術分野において既知の方法に従って安定させる。]
[0074] 洗剤成分
組成物は、典型的に１つ以上の洗剤成分を含んでなる。本明細書で使用するとき、洗剤組成物としては、物品並びに洗浄及び処理用組成物が挙げられる。本明細書で使用するとき、「洗浄及び／又は処理用組成物」という用語は、特に指示しない限り、タブレット、顆粒又は粉末形態の多目的又は「強力」洗浄剤のもの、特に洗濯洗剤；液体、ゲル又はペースト形態の多目的洗浄剤、特にいわゆる強力液体型；液体上質布帛用洗剤；手洗い用皿洗い洗剤又は軽質皿洗い洗剤、特に高発泡型のもの；家庭用及び業務用の種々のタブレット、顆粒、液体及びすすぎ補助剤型を含む食器洗い機用皿洗い洗剤を含む。組成物はまた、単位用量パッケージであってもよく、当該技術分野において既知のパッケージ、並びに水溶性、非水溶性及び／又は透水性のパッケージを含む。]
[0075] 本発明の洗剤組成物は、１以上の本発明のリパーゼ変異体を含んでもよい。リパーゼ変異体に加え、洗剤組成物は洗剤成分を更に含む。以下に例示される洗剤成分の非限定的なリストは、本組成物において使用するのに適しており、例えば、クリーニング性能を補助若しくは向上させるために、洗浄される基材の処理のために、又は着色剤、染料などを用いる場合と同様に洗浄組成物の審美性を変化させるために、望ましくは本発明の特定の実施形態に組み込まれてよい。このような追加成分の明確な性質及びそれらを組み込む濃度は、組成物の物理的形態及びそれが使用される洗浄作業の性質に依存する。好適な洗剤成分としては、界面活性剤、ビルダー、キレート剤、転染抑制剤、分散剤、酵素、及び酵素安定剤、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素源、予形成過酸（preformed peracids）、高分子分散剤、増白剤、泡抑制剤、染料、抗腐食剤、変色防止剤、香料マイクロカプセル、柔軟剤、担体、ヒドロトロープ、加工助剤、溶媒及び／又は顔料が挙げられるが、これらに限定されない。]
[0076] 典型的な洗剤は重量比で、以下の成分の任意の混合を含む。５〜３０％の界面活性剤、好ましくは直鎖アルキルベンゼンスルホナート及びアルコールエトキシサルフェートなどのアニオン性界面活性剤、０．００５〜０．１％のプロテアーゼ活性タンパク質で、このプロテアーゼは好ましくはコロナーゼ（商標）、ＦＮＡ、ＦＮ４又はサビナーゼ（商標）、０．００１〜０．１％のアミラーゼ活性タンパク質から選択され、このアミラーゼは好ましくはテルマミル（商標）ナタラーゼ（商標）、ステインザイム（商標）及びピュラスター（Purastar）（商標）、及び０．１〜３％のキレート剤、好ましくはジエチレントリアミン五酢酸から選択される。顆粒及びタブレット製品については、かかる代表的な洗剤は、更に５〜２０重量％の漂白剤、好ましくは過炭酸ナトリウム；１〜４重量％の漂白活性化剤、好ましくはＴＡＥＤ並びに／又は０〜３０重量％、好ましくは５〜３０重量％、より好ましくは１０重量％未満のアルミノケイ酸塩ゼオライトＡ及び／若しくはトリポリホスフェートのようなビルダーを含むであろう。]
[0077] 漂白剤−本発明の洗剤組成物は１以上の漂白剤を含んでよい。]
[0078] 一般的に、漂白剤が使用される場合、本発明の組成物は、標記洗浄組成物の約０．１重量％〜約５０重量％、又は更に約０．１重量％〜約２５重量％の漂白剤を含んでよい。適切な漂白剤の例としては、以下のものが挙げられる。]
[0079] （１）過ホウ酸のナトリウム塩（通常モノ−又はテトラ−ヒドレート）、過炭酸塩、過硫酸塩、過リン酸塩、過ケイ酸塩及びこれらの混合物のようなアルカリ金属塩類を含む、過酸化水素源、例えば無機過水和物塩類。発明の１つの態様では、無機過水和物塩は、過ホウ酸塩、過炭酸塩、及びこれらの混合物のナトリウム塩類からなる群から選択される。]
[0080] （２）Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌの漂白活性化剤（式中、Ｒは、漂白活性化剤が疎水性の場合、６〜１４個、又は８〜１２個の炭素原子を有し、漂白活性化剤が親水性の場合、６個未満又は４個未満さえの炭素原子を有し、所望により分枝鎖である、アルキル基であり；Ｌは脱離基である）。適切な脱離基の例は、安息香酸及びその誘導体（特に、ベンゼンスルホネート）である。好適な漂白活性化剤類としては、ドデカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシ安息香酸又はその塩類、３，５，５−トリメチルヘキサノイルオキシベンゼンスルホネート、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）及びノナノイルオキシベンゼンスルホネート（ＮＯＢＳ）が挙げられる。適切な漂白活性剤は、ＰＣＴ国際公開特許第９８／１７７６７号にも開示されている。いかなる好適な漂白活性化剤も使用してよいが、発明の１つの態様では、標記洗浄組成物は、ＮＯＢＳ、ＴＡＥＤ又はこれらの混合物を含んでもよい。]
[0081] （３）予め生成された過酸類
過酸及び／又は漂白活性化剤（存在する場合）は、一般に、組成物を基準にして、約０．１〜約６０重量％、約０．５〜約４０重量％、又は更に約０．６〜約１０重量％の量で、組成物中に存在する。１種以上のその疎水性前駆体は、１種以上の親水性過酸又はその前駆体と組み合わせて使用してもよい。]
[0082] 過酸化水素供給源及び過酸又は漂白活性化剤の量は、有効酸素（過酸化物供給源より供給される）対過酸のモル比が、１：１〜３５：１、又は更に２：１〜１０：１となるように選択されてよい。]
[0083] 界面活性剤−本発明による洗剤組成物は、界面活性剤又は界面活性剤系を含んでよく、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、双極性界面活性剤、半極性非イオン性界面活性剤及びこれらの混合物から選択され得る。存在する場合、界面活性剤は、典型的には、対象となる組成物の約０．１重量％〜約６０重量％、約０．１重量％〜約４０重量％、約０．１重量％〜約１２重量％、約１重量％〜約５０重量％、更には約５重量％〜約４０重量％の濃度で存在する。]
[0084] 含まれるとき、洗剤は通常、約１％〜約４０％の、アルキルベンゼンスルホン酸塩直鎖、α−オレフィンスルホネート、アルキルサルフェート（脂肪族アルコールスルフェート）、アルコールエトキシサルフェート、第２級アルカンスルホネート、α−スルホ脂肪酸メチルエステル、コハク酸アルキル又はコハク酸アルケニル、又は石鹸などの陰イオン性界面活性剤を含む。]
[0085] 洗剤は通常、約０．２％〜約４０％の、アルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシ化脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミド、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、又はグルコサミンのＮ−アシルＮ−アルキル誘導体（「グルコアミド（glucamides）」）などの非イオン性界面活性剤を含む。]
[0086] ビルダー類−本発明の洗剤組成物は、１種以上の洗剤ビルダー又はビルダー系を含んでよい。ビルダーを使用する場合、標記組成物は、典型的には、標記組成物の少なくとも約１重量％、約５重量％〜約６０重量％、又は更に約１０重量％〜約４０重量％のビルダーを含む。]
[0087] 洗剤組成物は、（ａ）０重量％〜１０重量％、好ましくは０重量％〜５重量％のゼオライトビルダー、（ｂ）０重量％〜１０重量％、好ましくは０重量％〜５重量％のリン酸ビルダー、及び（ｃ）所望により０重量％〜５重量％のケイ酸塩を含んでよい。]
[0088] ビルダーには、ポリホスフェートのアルカリ金属、アンモニウム及びアルカノールアンモニウム塩、アルカリ金属ケイ酸塩又は層状ケイ酸塩、アルカリ土類及びアルカリ金属カーボネート、アルミノケイ酸塩ブイウダー及び各種アルカリ金属、エチレンジアミン四酢酸及びニトリロ三酢酸等のポリ酢酸のアンモニウム及び置換されたアンモニウム塩、並びにメリト酸、コハク酸、クエン酸、オキシジコハク酸、ポリマレイン酸、ベンゼン１，３，５−トリカルボン酸、カルボキシメチルオキシコハク酸などのポリカルボキシレート、及び可溶性塩が挙げられるがこれらに限定されない。]
[0089] キレート剤−本明細書の洗剤組成物は、キレート剤を含有してもよい。好適なキレート剤としては、銅、鉄及び／又はマンガンキレート剤、並びにこれらの混合物が挙げられる。キレート剤を使用する場合、標記組成物は、標記組成物の約０．００５重量％〜約１５重量％、又は更に約３．０重量％〜約１０重量％のキレート剤を含んでよい。]
[0090] アミン混合物−好ましくは、この組成物は、次の一般構造式：ビス（（Ｃ２Ｈ５Ｏ）（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ）（ＣＨ３）−Ｎ＋−ＣｘＨ２ｘ−Ｎ＋−（ＣＨ３）−ビス（（Ｃ２Ｈ５Ｏ）（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ）（式中、ｎは２０〜３０であり、かつｘは３〜８である）を有する化合物、又はこの硫酸化若しくはスルホン化変異体を含む。]
[0091] 増白剤−本発明の洗剤組成物は、洗浄される物品の外観を変えることのできる追加成分（蛍光光沢剤など）を含有することもできる。これら増白剤は、紫外域に吸収されて可視となって放射される。適切な蛍光増白剤の濃度としては、約０．０１重量％、約０．０５重量％、約０．１重量％、更には約０．２重量％の低い濃度から、０．５重量％又は更には０．７５重量％の高い濃度までが挙げられる。]
[0092] 分散剤−本発明の組成物は分散剤も含むことができる。好適な水溶性有機物質類としては、ホモポリマー又はコポリマーの酸類又はそれらの塩類が挙げられ、それらのうちのポリカルボン酸は、互いに炭素原子２個を超えない程度に離れている少なくとも２個のカルボキシルラジカルを含む。]
[0093] 酵素−本発明のリパーゼ変異体に加えて、洗剤組成物は、クリーニング性能及び／又は布帛ケアベネフィットを提供する１種以上のさらなる酵素を含むことが可能である。かかる酵素には、プロテアーゼ、別のリパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼ、例えば、ラッカーゼ、及び／又はペルオキシダーゼが含まれる。]
[0094] 一般に、選択された酵素の特徴は、選択された洗剤と適合性がなければならず（すなわち、至適ｐＨ、その他の酵素的成分及び非酵素成分等）、酵素は有効量で存在する必要がある。]
[0095] 好適なプロテアーゼには、動物、植物、又は微生物起源のプロテアーゼが挙げられる。微生物起源が好ましい。化学的に修飾された又はタンパク質操作した変異体が含まれる。プロテアーゼは、セリンプロテアーゼ又はメタロプロテアーゼであってもよく、好ましくは、アルカリ性微生物プロテアーゼ又はトリプシン様プロテアーゼである。アルカリ性プロテアーゼの例はサブチリシンであり、特にバチルス由来のサブチリシン、例えば、サブチリシンノボ（subtilisin Novo）、サブチリシンカールズベルグ（Carlsberg）、サブチリシン３０９、サブチリシン１４７及びサブチリシン１６８（国際公開特許第ＷＯ８９／０６２７９号に記載）、国際公開特許第ＷＯ０５／１０３２４４号の配列番号４及び配列番号７である。他の好適なセリンプロテアーゼとしては、国際公開特許第２００５０５２１４６号に開示された、マイクロコッカス（Micrococcineae）種、特にセルノナス（Cellulonas）種及びこれらの変異体由来のものが挙げられる。トリプシン様プロテアーゼの例は、トリプシン（例えばブタ又はウシ起源の）並びに国際公開特許第８９／０６２７０号及び同第９４／２５５８３号に記載のフサリウムプロテアーゼである。]
[0096] 有用なプロテアーゼの例は、国際公開特許第９２／１９７２９号、同第９８／２０１１５号、同第９８／２０１１６号及び同第９８／３４９４６号に記載の変異体、特に以下の位置のうち１以上が置換された変異体：２７、３６、５７、６８、７６、８７、９７、１０１、１０４、１０６、１２０、１２３、１６７、１７０、１９４、２０６、２１８、２２２、２２４、２３５、２４５、２５２及び２７４、並びにとりわけ以下の変異を有する変異体：（Ｋ２７Ｒ、Ｖ１０４Ｙ、Ｎ１２３Ｓ、Ｔ１２４Ａ）、（Ｎ７６Ｄ、Ｓ１０３Ａ、Ｖ１０４Ｉ）、又は（Ｓ１０１Ｇ、Ｓ１０３Ａ、Ｖ１０４Ｉ、Ｇ１５９Ｄ、Ａ２３２Ｖ、Ｑ２３６Ｈ、Ｑ２４５Ｒ、Ｎ２４８Ｄ、Ｎ２５２Ｋ）である。有用なプロテアーゼのその他の例は、国際公開特許第ＷＯ０５／０５２１４６号に記載の変異型、特に次の位置の１以上に置換を有する変異型である：１４、１６、３５、６５、７５、７６、７９、１２３、１２７、１５９及び１７９。]
[0097] 好ましい市販のプロテアーゼ酵素としては、アルカラーゼ（商標）、サビナーゼ（商標）、プリマーゼ（商標）、デュララーゼ（商標）、エスペラーゼ（商標）、コロナーゼ（商標）、ポラザイム（商標）及びカンナーゼ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）、マキサターゼ（商標）、マクサカル（商標）、マクサぺム（商標）、プロペラーゼ（商標）、プラフェクト（商標）、プラフェクトプライム（商標）、プラフェクトＯｘＰ（商標）、ＦＮＡ、ＦＮ２、ＦＮ３及びＦＮ４（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）が挙げられる。]
[0098] リパーゼは、細菌由来又は真菌由来のリパーゼを含む。化学的に修飾された又はタンパク質操作した変異体が含まれる。有用なリパーゼの例としては、例えば、欧州特許第ＥＰ２５８ ０６８号及び同第ＥＰ３０５ ２１６号に記載されているＨ．ラヌギノーサ（同義語Ｔ．ラノギノサス）、又は国際公開特許第ＷＯ９６／１３５８０号に記載されているＨ．イソレンスから得られるヒューミコラ（同義語は、サーモミセス）、例えばＰ．アルカリゲネス又はＰ．シュードアルカリゲネス（欧州特許第ＥＰ２１８ ２７２号）、Ｐ．セパシア（欧州特許ＥＰ３３１ ３７６）、Ｐ．スタツェリ（ＧＢ１，３７２，０３４）、Ｐ．フルオレッセンス、シュードモナスｓｐ．菌株ＳＤ７０５（国際公開特許第ＷＯ９５／０６７２０号、及び同第ＷＯ９６／２７００２号）、Ｐ．ウィスコンシネシス（国際公開特許第ＷＯ９６／１２０１２号）から得られるシュードモナスリパーゼ、例えばＢ．サブティリス（Ｄａｒｔｏｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３），Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，１１３１，２５３−３６０）、Ｂ．ステアサーモフィラス（日本特許第ＪＰ６４／７４４９９２号）又はＢ．プミルス（国際公開特許第ＷＯ９１／１６４２２号）から得られるバチルスリパーゼ、などから得られるリパーゼが挙げられる。]
[0099] その他の例は、次に記載されているようなリパーゼ変異型である：国際公開特許第ＷＯ９２／０５２４９号、同第ＷＯ９４／０１５４１号、欧州特許第４０７ ２２５号、同第２６０ １０５号、国際公開特許第ＷＯ９５／３５３８１号、同第ＷＯ９６／００２９２号、同第ＷＯ９５／３０７４４号、同第ＷＯ９４／２５５７８号、同第ＷＯ９５／１４７８３号、同第ＷＯ９５／２２６１５号、同第ＷＯ９７／０４０７９号及び同第ＷＯ９７／０７２０２号。]
[0100] 他の市販されているリパーゼ酵素としては、リポラーゼ（商標）、リポラーゼウルトラ（商標）及びライペックス（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）が挙げられる。]
[0101] 好適なアミラーゼ（α及び／又はβ）には細菌由来又は真菌由来のアミラーゼが含まれる。化学的に修飾された又はタンパク質操作した変異体が含まれる。アミラーゼとしては、バチルス、例えば、バチルス・リケニフォルミス（B. licheniformis）の特別菌株から得たアミラーゼが挙げられ、これは英国特許第１，２９６，８３９号により詳細に記載されている。]
[0102] 有用なアミラーゼの例としては、国際公開特許第ＷＯ９４／０２５９７号、同第ＷＯ９４／１８３１４号、同第ＷＯ９６／２３８７３号、及び同第ＷＯ９７／４３４２４号に記載の変異型であり、特に次の位置の１以上に置換を有する変異型である：１５、２３、１０５、１０６、１２４、１２８、１３３、１５４、１５６、１８１、１８８、１９０、１９７、２０２、２０８、２０９、２４３、２６４、３０４、３０５、３９１、４０８、及び４４４。]
[0103] 市販されているアミラーゼとしては、デュラミル（商標）、ターマミル（商標）、ステインザイム（商標）、ステインザイムウルトラ（商標）、ステインザイムプラス（商標）、ファンガミル（商標）及びバン（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）、ラピダーゼ（商標）及びピュラスター（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）が挙げられる。]
[0104] 好適なセルラーゼには、細菌由来又は真菌由来のセルラーゼが挙げられる。化学的に修飾された又はタンパク質操作した変異体が含まれる。好適なセルロースにはバチルス属（genera Bacillus）、シュードモナス（Pseudomonas）属、フサリウム（Fusarium）属、チエラビア（Thielavia）属、アクレモニウム（Acremonium）属由来のセルロースを挙げることができ、例えば、フミコラ・インソレンス（Humicola insolens）、ミセリオフトラ・テルモフィラ（Myceliophthora thermophila）から作成される真菌セルラーゼ、及び米国特許第４，４３５，３０７号、同第５，６４８，２６３号、同第５，６９１，１７８号、同第５，７７６，７５７号及び国際公開特許第ＷＯ８９／０９２５９号に開示されているフザリウム・オキスポラム（Fusarium oxysporum）が挙げられる。]
[0105] 特に好適なセルラーゼは、色彩維持利点のある（colour care benefits）アルカリ性セルラーゼ又は中性セルラーゼである。かかるセルラーゼの例は、欧州特許第０ ４９５ ２５７号、同第０ ５３１ ３７２号、国際公開特許第９６／１１２６２号、同第９６／２９３９７号、同第９８／０８９４０号に記載されたセルラーゼである。他の例は、国際公開特許第９４／０７９９８号、欧州特許第０ ５３１ ３１５号、米国特許第５，４５７，０４６号、同第５，６８６，５９３号、同第５，７６３，２５４号、国際公開特許第９５／２４４７１号、同第９８／１２３０７号及び国際出願第ＰＣＴ／ＤＫ９８／００２９９号に記載されたもののようなセルラーゼ変異体である。]
[0106] 市販されているセルラーゼとしては、レノザイム（商標）、セルクリーン（商標）、エンドラーゼ（商標）、セルザイム（商標）、及びケアザイム（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）、クラリナーゼ（商標）、及びピュラダックス（Puradax）ＨＡ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）、及びＫＡＣ−５００（Ｂ）（商標）（花王株式会社）が挙げられる。]
[0107] ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ：
好適なペルオキシダーゼ／オキシダーゼは、植物由来、細菌由来又は真菌由来のものが挙げられる。化学的に修飾された又はタンパク質操作した変異体が含まれる。有用なペルオキシダーゼの例は、コプリナス（Coprinus）属のペルオキシダーゼ、例えば、国際公開特許第ＷＯ９３／２４６１８号、同第ＷＯ９５／１０６０２号、及び同第ＷＯ９８／１５２５７号に記載のようなＣ．サイネレウス（cinereus）及びその変異型のペルオキシダーゼである。]
[0108] 市販のペルオキシダーゼは、グアードザイム（Guardzyme）（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）を含む。]
[0109] 洗浄組成物中に存在する場合、上述した酵素は、組成物の約０．００００１重量％〜約２重量％、約０．０００１重量％〜約１重量％、又は更に約０．００１重量％〜約０．５重量％の濃度の酵素タンパク質で存在してよい。]
[0110] 酵素安定剤−種々の技法によって、洗剤に使用する酵素を安定化させることができる。本明細書で採用される酵素は、カルシウムイオン及び／又はマグネシウムイオンを酵素に供給する、最終組成物中のカルシウムイオン及び／又はマグネシウムイオンの水溶性供給源の存在によって安定化させることができる。さらなる従来の安定剤、例えば、プロピレングリコール又はグリセロールのようなポリオール、糖又は糖アルコール、乳酸、ホウ酸、又はホウ酸誘導体、例えば、芳香族ホウ酸エステル、又は４−フォルミルフェニルボロン酸のようなフェニルボロン酸誘導体もまた使用してよく、組成物は例えば国際公開特許第９２／１９７０９号及び同第９２／１９７０８号に記載のように配合してよい。]
[0111] 溶剤−好適な溶媒としては、水及び他の溶剤（例えば、親油性流体）が挙げられる。好適な親油性流体の例としては、シロキサン、他のシリコーン、炭化水素、グリコールエーテル、グリセリンエーテルのようなグリセリン誘導体、ペルフルオロ化アミン、ペルフルオロ化及びハイドロフルオロエーテル溶媒、低揮発性の非フッ素化有機溶媒、ジオール溶媒、環境に優しいその他の溶媒、並びにこれらの混合物が挙げられる。]
[0112] 光漂白剤−組成物は光漂白剤を含んでよい。好ましくは、光漂白剤は、キサンテン染料光漂白剤、光開始剤及びこれらの混合物から選択される。]
[0113] 適切な光漂白剤としては、触媒光漂白剤及び光開始剤が挙げられる。適切な触媒光漂白剤としては、以下の式の水溶性フタロシアニンからなる群から選択される触媒光漂白剤が挙げられる。



式中、
ＰＣはフタロシアニン環構造であり、
ＭｅはＺｎ、Ｆｅ（ＩＩ）、Ｃａ、Ｍｇ、Ｎａ、Ｋ、Ａｌ−Ｚ１、Ｓｉ（ＩＶ）、Ｐ（Ｖ）、Ｔｉ（ＩＶ）、Ｇｅ（ＩＶ）、Ｃｒ（ＶＩ）、Ｇａ（ＩＩＩ）、Ｚｒ（ＩＶ）、Ｉｎ（ＩＩＩ）、Ｓｎ（ＩＶ）、又はＨｆ（ＶＩ）であり、
Ｚ１はハロゲン化物、サルフェート、ニトレート、カルボキシレート、アルカノレート、又はヒドロキシルイオンであり、
ｑは０、１、又は２であり、
ｒは１〜４であり、
Ｑ１はスルホ若しくはカルボキシル基、又は以下の式のラジカルであり、
−ＳＯ２Ｘ２−Ｒ１−Ｘ３＋、−Ｏ−Ｒ１−Ｘ３＋、又は−（ＣＨ２），−Ｙ１＋、
式中、
Ｒ１は分枝又は非分枝のＣ１〜Ｃ８アルキレン、又は１，３−若しくは１，４−フェニレンであり、
Ｘ２は−ＮＨ−、又は−Ｎ−Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ｘ３＋は次式の基であり、



又はＲ１がＣ１〜Ｃ８アルキレンの場合、次式の基でもある。]
[0114] Ｙ１＋は次式の基である。



ｔは０又は１である。
上記の式中、
Ｒ２及びＲ３は互いに独立してＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ４はＣ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ５〜Ｃ７シクロアルキル又はＮＲ７Ｒ８であり、
Ｒ５及びＲ６は互いに独立してＣ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ｒ７及びＲ８は互いに独立して水素又はＣ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ｒ９及びＲ１０は互いに独立して非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、又はヒドロキシル、シアノ、カルボキシル、カルボ−Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、フェニル、ナフチル、若しくはピリジルで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
ｕは１〜６であり、
Ａ１は芳香族５〜７員窒素複素環を完成させる単位であり、この環には、適切な場合、環員として更に１又は２個の窒素原子が含まれていてもよく、
Ｂ１は飽和５〜７員窒素複素環を完成させる単位であり、この環には、適切な場合、環員として１〜２個の窒素、酸素、及び／又は硫黄原子が含まれていてもよく、
Ｑ２はヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ２２アルキル、分枝Ｃ３〜Ｃ２２アルキル、Ｃ２〜Ｃ２２アルケニル、分枝Ｃ３〜Ｃ２２アルケニル及びこれらの混合物、Ｃ１〜Ｃ２２アルコキシ、スルホラジカル若しくはカルボキシルラジカル、次式のラジカル、]
[0115] 次式の分枝アルコキシラジカル



次式のアルキルエチレンオキシ単位、



又は次式のエステルである。



式中、
Ｂ２は水素、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０アルコキシ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＳＯ３−Ｍ１、−ＯＳＯ３−Ｍ１、−ＰＯ３２−Ｍ１、−ＯＰＯ３２−Ｍ１、及びこれらの混合物であり、
Ｂ３は水素、ヒドロキシル、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３−Ｍ１、−ＯＳＯ３Ｍ１、又はＣ１〜Ｃ６アルコキシであり、
Ｍ１は水溶性カチオンであり、
Ｔ１は−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、
Ｘ１及びＸ４は互いに独立して−Ｏ−、−ＮＨ−、又は−Ｎ−Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ｒ１１及びＲ１２は互いに独立して水素、スルホ基及びその塩、カルボキシル基及びその塩、又はヒドロキシル基であり、Ｒ１１及びＲ１２ラジカルの少なくとも１つはスルホ基又はカルボキシル基又はそれらの塩であり、
Ｙ２は−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、又は−Ｎ−Ｃ１〜Ｃ５アルキルであり、
Ｒ１３及びＲ１４は互いに独立して水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シアノ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、スルホ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、カルボキシ又はハロゲン−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、非置換フェニル、又はハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、若しくは、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシで置換されたフェニル、スルホ若しくはカルボキシルであり、若しくはＲ１３及びＲ１４は、結合している窒素原子とともに飽和５又は６員複素環を形成し、この環には環員として更に１個の窒素又は酸素原子が含まれていてもよく、
Ｒ１５及びＲ１６は互いに独立してＣ１〜Ｃ６アルキル又はアリール−Ｃ１〜Ｃ６アルキルラジカルであり、
Ｒ１７は水素、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、又はハロゲン、ヒドロキシル、シアノ、フェニル、カルボキシル、カルボ−Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ若しくはＣ１〜Ｃ６アルコキシで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１８はＣ１〜Ｃ２２アルキル、分枝Ｃ３〜Ｃ２２アルキル、Ｃ１〜Ｃ２２アルケニル又は分枝Ｃ３〜Ｃ２２アルケニル、Ｃ３〜Ｃ２２グリコール、Ｃ１〜Ｃ２２アルコキシ、分枝Ｃ３〜Ｃ２２アルコキシ、及びこれらの混合物であり、
Ｍは水素、又はアルカリ金属イオン若しくはアンモニウムイオンであり、
Ｚ２−は塩素、臭素、アルキルサルフェート又はアリールサルフェートイオンであり、
ａは０又は１であり、
ｂは０〜６であり、
ｃは０〜１００であり、
ｄは０又は１であり、
ｅは０〜２２であり、
ｖは２〜１２の整数であり、
ｗは０又は１であり、
Ａ−は有機又は無機アニオンであり、
ｓは、Ａ−が一価アニオンの場合はｒに等しく、多価アニオンの場合はｒ以下であり、Ａｓ−は正電荷を打ち消す必要があり、ｒが１でない場合、Ｑ１ラジカルは同じでも異なっていてもよく、
フタロシアニン環構造には更に可溶化基を含んでもよい。]
[0116] その他の適切な触媒光漂白剤としては、キサンテン色素及びこれらの混合物が挙げられる。別の態様では、適切な触媒光漂白剤としては、スルホン化亜鉛フタロシアニン、スルホン化アルミニウムフタロシアニン、エオシンＹ、ホキシン（Phoxine）Ｂ、ローズベンガル、Ｃ．Ｉ．食用赤色１４及びこれらの混合物からなる群から選択される触媒光漂白剤が挙げられる。別の態様では、適切な光漂白剤は、スルホン化亜鉛フタロシアニン及びスルホン化アルミニウムフタロシアニンの混合物であってよく、混合物のスルホン化亜鉛フタロシアニン対スルホン化アルミニウムフタロシアニンの重量比は１超、１超〜約１００未満、又は約１〜約４である。]
[0117] 適切な光開始剤としては、芳香族１，４−キノン（アントラキノン及びナフタキノンなど）、α−アミノケトン（とりわけベンゾイル部分を含むもの、あるいはα−アミノアセトフェノンと呼ばれているもの）、α−ヒドロキシケトン（とりわけα−ヒドロキシアセトフェノン）、リン含有光開始剤（モノアシル、ビスアシル、及びトリスアシルホスフィンオキシド、並びにスルフィドなど）、ジアルコキシアセトフェノン、α−ハロアセトフェノン、トリスアシルホスフィンオキシド、ベンゾイン及びベンゾイン系光開始剤、並びにこれらの混合物からなる群から選択される光開始剤が挙げられる。別の態様では、適切な光開始剤としては、２−エチルアントラキノン、ビタミンＫ３、２−サルフェート−アントラキノン、２−メチル−１−［４−フェニル］−２−モルホリノプロパン−１−オン（イルガキュア（Irgacure）（登録商標）９０７）、（２−ベンジル−２−ジメチルアミノ−１−（４−モルホリノフェニル）−ブタン−１−オン（イルガキュア（登録商標）３６９）、（１−［４−（２−ヒドロキシエトキシ）−フェニル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−１−プロパン−１−オン）（イルガキュア（登録商標）２９５９）、１−ヒドロキシ−シクロヘキシル−フェニル−ケトン（イルガキュア（登録商標）１８４）、オリゴ［２−ヒドロキシ−２−メチル−１−［４（１−メチル）−フェニル］プロパノン（イーサキュア（Esacure）（登録商標）ＫＩＰ１５０）、２−４−６−（トリメチルベンゾイル）ジフェニル−ホスフィンオキシド、ビス（２，４，６−トリメチルベンゾイル）−フェニル−ホスフィンオキシド（イルガキュア（登録商標）８１９）、（２，４，６−トリメチルベンゾイル）フェニルホスフィン酸エチルエステル（ルシリン（Lucirin）（登録商標）ＴＰＯ−Ｌ）、及びこれらの混合物からなる群から選択される光開始剤が挙げられる。]
[0118] 光漂白剤は組み合わせて使用することができる（いずれかの光漂白剤混合物を使用してもよい）。適切な光漂白剤は、Ａｌｄｒｉｃｈ（米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）、Ｆｒｏｎｔｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（米国ユタ州ローガン）、Ｃｉｂａ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（スイス、バーゼル）、ＢＡＳＦ（ドイツ、ルートヴィヒスハーフェン）、Ｌａｍｂｅｒｔｉ Ｓ．ｐ．Ａ（イタリア、ガッララーテ）、Ｄａｙｇｌｏ Ｃｏｌｏｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（インド、ムンバイ）、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｄｙｅｓｔｕｆｆｓ Ｃｏｒｐ．（米国ロードアイランド州イーストプロビデンス）から購入可能であり、及び／又は本明細書に記載の実施例に従って生成可能である。]
[0119] 布帛色調剤−組成剤は布帛色調剤を含む。布帛色調剤は、可視光線スペクトルの少なくとも一部を吸収するため、表面の色合いを変えることができる。好適な布帛色調剤としては、国際公開特許第ＷＯ２００７／０８７２５７号の１５及び１６ページに詳細が記載され、本明細書に参考として組み込まれる試験方法１の要件を満足する染料、染料粘度共役体、及び顔料が挙げられる。適切な染料としては、小分子染料及びポリマー染料が挙げられる。適切な小分子染料としては、ダイレクトブルー、ダイレクトレッド、ダイレクトバイオレット、アシッドブルー、アシッドレッド、アシッドバイオレット、ベーシックブルー、ベーシックバイオレット、及びベーシックレッドのカラーインデックス（Ｃ．Ｉ．）分類に該当する染料、又はこれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられ、例えば、次のものが挙げられる。]
[0120] （１）次式のトリス−アゾ系ダイレクトブルー染料



式中、ナプチル環Ａ、Ｂ、及びＣの少なくとも２つがスルホネート基で置換されており、環Ｃは５位をＮＨ２又はＮＨＰｈ基で置換されてもよく、Ｘは２つ以下のスルホネート基で置換されたベンジル又はナフチル環であり、２位をＯＨ基で置換されてもよく、更にＮＨ２又はＮＨＰｈ基で置換されてもよい。]
[0121] （２）次式のビス−アゾ系ダイレクトバイオレット染料



式中、ＺはＨ又はフェニルであり、環Ａは、好ましくは矢印で示される位置がメチル及びメトキシ基で置換されており、環Ａはナフチル環であってもよく、Ｙ基はベンジル又はナフチル環であり、サルフェート基で置換されており、メチル基で１又は２置換されてもよい。]
[0122] （３）次式のブルー又はレッドアシッド染料



式中、Ｘ及びＹの少なくとも１つは芳香族基でなければならない。１つの態様では、芳香族基は双方とも、置換ベンジル又はナフチル基であってよく、このベンジル又はナフチル基はアルキル、アルキルオキシ、又はアリールオキシ基などの非水溶化基で置換されてよく、Ｘ及びＹはスルホネート又はカルボキシレートなどの水溶化基で置換されてなくてもよい。別の態様では、Ｘはニトロ基で置換したベンジル基であり、Ｙはベンジル基である。]
[0123] （４）次の構造のレッドアシッド染料



式中、Ｂはアルキル、アルキルオキシ、又はアリールオキシ基などの非水溶化基で置換されてもよいナフチル又はベンジル基であり、Ｂはスルホネート又はカルボキシレートなどの水溶化基で置換されてなくてもよい。]
[0124] （５）次の構造のジアゾ染料



式中、Ｘ及びＹは、互いに独立してそれぞれ、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル又はＣ１〜Ｃ４−アルコキシであり、Ｒαは水素又はアリールであり、ＺはＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル又はカルボニルであり、ｎは１又は２であり、及びｍは０、１又は２であり、並びにこれらの対応する塩、並びにこれらの混合物である。]
[0125] （６）次の構造のトリフェニルメタン染料






並びにこれらの混合物。別の態様では、適切な小分子染料としては、カラーインデックス（染色業者及びカラーリスト協会（Society of Dyers and Colourists）、英国ブラッドフォード）番号がダイレクトバイオレット９、ダイレクトバイオレット３５、ダイレクトバイオレット４８、ダイレクトバイオレット５１、ダイレクトバイオレット６６、ダイレクトブルー１、ダイレクトブルー７１、ダイレクトブルー８０、ダイレクトブルー２７９、アシッドレッド１７、アシッドレッド７３、アシッドレッド８８、アシッドレッド１５０、アシッドバイオレット１５、アシッドバイオレット１７、アシッドバイオレット２４、アシッドバイオレット４３、アシッドレッド５２、アシッドバイオレット４９、アシッドブルー１５、アシッドブルー１７、アシッドブルー２５、アシッドブルー２９、アシッドブルー４０、アシッドブルー４５、アシッドブルー７５、アシッドブルー８０、アシッドブルー８３、アシッドブルー９０、アシッドブルー１１３、アシッドブラック１、ベーシックバイオレット１、ベーシックバイオレット３、ベーシックバイオレット４、ベーシックバイオレット１０、ベーシックバイオレット３５、ベーシックブルー３、ベーシックブルー１６、ベーシックブルー２２、ベーシックブルー４７、ベーシックブルー６６、ベーシックブルー７５、ベーシックブルー１５９、及びこれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。別の態様では、適切な小分子染料としては、カラーインデックス（染色業者及びカラーリスト協会（Society of Dyers and Colourists）、英国ブラッドフォード）番号がアシッドバイオレット１７、アシッドバイオレット４３、アシッドレッド５２、アシッドレッド７３、アシッドレッド８８、アシッドレッド１５０、アシッドブルー２５、アシッドブルー２９、アシッドブルー４５、アシッドブルー１１３、アシッドブラック１、ダイレクトブルー１、ダイレクトブルー７１、ダイレクトバイオレット５１、及びこれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。別の態様では、適切な小分子染料としては、カラーインデックス（染色業者及びカラーリスト協会、英国ブラッドフォード）番号が、アシッドバイオレット１７、ダイレクトブルー７１、ダイレクトバイオレット５１、ダイレクトブルー１、アシッドレッド８８、アシッドレッド１５０、アシッドブルー２９、アシッドブルー１１３、又はこれらの混合物からなる群から選択される小分子染料が挙げられる。]
[0126] 好適なポリマー染料としては、共役色原体を含むポリマー（染料−ポリマー共役体）、ポリマーの骨格に共重合した色原体を有するポリマー、及びこれらの混合物からなる群から選択されるポリマー染料が挙げられる。]
[0127] 別の態様では、適切なポリマー染料としては、リキティント（Liquitint）（登録商標）（Ｍｉｌｌｉｋｅｎ、米国サウスカロライナ州スパータンバーグ）の名称で市販されている布帛直接着色剤、並びに少なくとも１つの反応染料と、ヒドロキシル部分、１級アミン部分、２級アミン部分、チオール部分、及びこれらの混合物からなる群から選択される部分を含むポリマーからなる群から選択されるポリマーとから形成される染料−ポリマー共役体からなる群から選択されるポリマー染料が挙げられる。更に別の態様では、好適なポリマー染料としては、リキティント（Liquitint）（登録商標）（米国サウスカロライナ州スパルタンバーグのＭｉｌｌｉｋｅｎ）バイオレットＣＴ、リアクティブブルー、リアクティブバイオレット、又はリアクティブレッド染料で共役されているカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ＣＭＣが共役されているものとしては、メガザイム（Megazyme）（アイルランド、ウイックロー）からＡＺＯ−ＣＭ−セルローズの商品名、商品コードＳ−ＡＣＭＣで市販されているＣ．Ｉ．リアクティブブルー１９、アルコキシル化トリフェニール−メタン重合着色料、アルコキシル化チオフェン重合着色料、及びこれらの混合物からなる群から選択されるポリマー染料が挙げられる。]
[0128] 適切な染料粘土共役体としては、少なくとも１つのカチオン性／塩基性染料とスメクタイト粘土を含む群から選択される染料粘土共役体、及びこれらの混合物が挙げられる。別の態様では、好適な染料粘土共役体としては、以下のＣ．Ｉ．からなる群から選択される１つのカチオン性／塩基性染料からなる群から選択される染料粘土共役体が挙げられる。ベーシックイエロー１〜１０８、Ｃ．Ｉ．ベーシックオレンジ１〜６９、Ｃ．Ｉ．ベーシックレッド１〜１１８、Ｃ．Ｉ．ベーシックバイオレット１〜５１、Ｃ．Ｉ．ベーシックブルー１〜１６４、Ｃ．Ｉ．ベーシックグリーン１〜１４、Ｃ．Ｉ．ベーシックブラウン１〜２３、ＣＩベーシックブラック１〜１１、及びモンモリロナイト粘土、ヘクトライト粘土、サポナイト粘土、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される粘土。別の態様では、好適な染料粘土共役体としては以下の群から選択される染料粘土共役体が挙げられる：モンモリロナイトベーシックブルーＢ７ Ｃ．Ｉ．４２５９５共役体、モンモリロナイトベーシックブルーＢ９ Ｃ．Ｉ．５２０１５共役体、モンモリロナイトベーシックバイオレットＶ３ Ｃ．Ｉ．４２５５５共役体、モンモリロナイトベーシックグリーンＧ１ Ｃ．Ｉ．４２０４０共役体、モンモリロナイトベーシックレッドＲ１ Ｃ．Ｉ．４５１６０共役体、モンモリロナイトＣ．Ｉ．ベーシックブラック２共役体、ヘクトライトベーシックブルーＢ７ Ｃ．Ｉ．４２５９５共役体、ヘクトライトトベーシックブルーＢ９ Ｃ．Ｉ．５２０１５共役体、ヘクトライトベーシックバイオレットＶ３ Ｃ．Ｉ．４２５５５共役体、ヘクトライトベーシックグリーンＧ１ Ｃ．Ｉ．４２０４０共役体、ヘクトライトベーシックレッドＲ１ Ｃ．Ｉ．４５１６０共役体、ヘクトライトＣ．Ｉ．ベーシックブラック２共役体、サポナイトベーシックブルーＢ７ Ｃ．Ｉ．４２５９５共役体、サポナイトベーシックブルーＢ９ Ｃ．Ｉ．５２０１５共役体、サポナイトベーシックバイオレットＶ３ Ｃ．Ｉ．４２５５５共役体、サポナイトベーシックグリーンＧ１ Ｃ．Ｉ．４２０４０共役体、サポナイトベーシックレッドＲ１ Ｃ．Ｉ．４５１６０共役体、サポナイトＣ．Ｉ．ベーシックブラック２共役体及びこれらの混合物。]
[0129] 適切な顔料としては、フラバントロン、インダントロン、１〜４個の塩素原子を有する塩素化インダントロン、ピラントロン、ジクロロピラントロン、モノブロモジクロロピラントロン、ジブロモジクロロピラントロン、テトラブロモピラントロン、ペリレン−３，４，９，１０−テトラカルボン酸ジイミド（イミド基は置換されていないか、あるいはＣ１〜Ｃ３−アルキル又はフェニル若しくは複素環式ラジカルで置換されていてもよく、このフェニル及び複素環式ラジカルは更に、水溶性を付与しない置換基を有していてもよい）、アントラピリミジンカルボン酸アミド、ビオラントロン、イソビオラントロン、ジオキサジン顔料、銅フタロシアニン（１分子当たり２個以下の塩素原子を有していてもよい）、ポリクロロ−銅フタロシアニン、又はポリブロモクロロ−銅フタロシアニン（１分子当たり１４個以下の臭素原子を有する）、及びこれらの混合物からなる群から選択される顔料が挙げられる。]
[0130] 別の態様では、好適な顔料としては、ウルトラマリンブルー（Ｃ．Ｉ．ピグメントブルー２９）、ウルトラマリンバイオレット（Ｃ．Ｉ．ピグメントバイオレット１５）及びこれらの混合物からなる群から選択される顔料が挙げられる。]
[0131] 上述の布帛色調剤は、組み合わせて使用することができる（布帛色調剤の任意の混合物を使用することができる）。適切な布帛色調剤は、Ａｌｄｒｉｃｈ（米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）、Ｃｉｂａ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（スイス・べーゼル）、ＢＡＳＦ（ドイツ・ルートヴィヒスハーフェン）、Ｄａｙｇｌｏ Ｃｏｌｏｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（インド・ムンバイ）、Ｏｒｇａｎｉｃ Ｄｙｅｓｔｕｆｆｓ Ｃｏｒｐ．（米国ロードアイランド州イーストプロビデンス）、Ｄｙｓｔａｒ（ドイツ・フランクフルト）、Ｌａｎｘｅｓｓ（ドイツ・レーバークーゼン）、Ｍｅｇａｚｙｍｅ（アイルランド・ウィックロー）、Ｃｌａｒｉａｎｔ（スイス・ムッテンツ）、Ａｖｅｃｉａ（英国マンチェスター）から購入可能であり、及び／又は本明細書に記載の実施例に従って調製可能である。]
[0132] 好適な色調剤については、詳しくは米国特許第７，２０８，４５９（Ｂ２）号に記述されている。]
[0133] 好ましい布帛色調剤は、ダイレクトバイオレット９、ダイレクトバイオレット９９、アシッドレッド５２、アシッドブルー８０及びこれらの混合物から選択される。]
[0134] 漂白触媒−典型的な漂白触媒は、ペルオキシ酸及び／又はその塩から酸素原子を受け取りその酸素原子を酸化可能基質に受け渡すことができる。好適な漂白触媒としては、イミニウムカチオン類及びポリイオン類、イミニウム双性イオン類、変性アミン類、変性アミンオキシド類、Ｎ−スルホニルイミン類、Ｎ−ホスホニルイミン類、Ｎ−アシルイミン類、チアジアゾールジオキシド類、ペルフルオロイミン類、環状糖ケトン類、並びにこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。]
[0135] 好適なイミニウムカチオン及びポリイオンとしては、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ（１９９２），４９（２），４２３−３８（例えば４３３頁の化合物４を参照）に記載されているとおりに調製したＮ−メチル−３，４−ジヒドロイソキノリニウムテトラフルオロボレート、米国特許第５，３６０，５６９号（例えば１１段落目の実施例１を参照）に記載されているとおりに調製したＮ−メチル−３，４−ジヒドロイソキノリニウムｐ−トルエンスルホネート、及び米国特許第５，３６０，５６８号（例えば１０段落目の実施例３を参照）に記載されているとおりに調製したＮ−オクチル−３，４−ジヒドロイソキノリニウムｐ−トルエンスルホネートが挙げられるが、これらに限定されない。]
[0136] 好適なイミニウム双性イオンとしては、米国特許第５，５７６，２８２号（例えば３１段落目の実施例ＩＩを参照）に記載されているとおりに調製したＮ−（３−スルホプロピル）−３，４−ジヒドロイソキノリニウム分子内塩、米国特許第５，８１７，６１４号（例えば３２段落目の実施例Ｖを参照）に記載されているとおりに調製したＮ−［２−（スルホオキシ）ドデシル］−３，４−ジヒドロイソキノリニウム、分子内塩、ＰＣＴ国際公開特許第ＷＯ０５／０４７２６４号（例えば１８頁の実施例８を参照）に記載されているとおりに調製した２−［３−［（２−エチルヘキシル）オキシ］−２−（スルホオキシ）プロピル］−３，４−ジヒドロイソキノリニウム、分子内塩、及び２−［３−［（２−（ブチルオクチル）オキシ］−２−（スルホオキシ）プロピル］−３，４−ジヒドロイソキノリニウム、分子内塩が挙げられるが、これらに限定されない。]
[0137] 好適な変性アミン酸素移動触媒としては、１，２，３，４−テトラヒドロ−２−メチル−１−イソキノリノール（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９８７），２８（４８），６０６１〜６０６４に記載されている手順に従って生成させることができる）が挙げられるが、これに限定されない。好適な変性アミンオキシド酸素移動触媒としては、ナトリウム１−ヒドロキシ−Ｎ−オキシ−Ｎ−［２−（スルホオキシ）デシル］−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンが挙げられるが、これに限定されない。]
[0138] 好適なＮ−スルホニルイミン酸素移動触媒としては、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９０），５５（４），１２５４〜６１に記載されている手順に従って調製した３−メチル−１，２−ベンゾイソチアゾール１，１−ジオキシドが挙げられるが、これに限定されない。]
[0139] 好適なＮ−ホスホニルイミン酸素移動触媒としては、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（１９９４），（２２），２５６９〜７０に記載されている手順に従って生成させることのできる［Ｒ−（Ｅ）］−Ｎ−［（２−クロロ−５−ニトロフェニル）メチレン］−Ｐ−フェニル−Ｐ−（２，４，６−トリメチルフェニル）−ホスフィン酸アミドが挙げられるが、これに限定されない。]
[0140] 好適なＮ−アシルイミン酸素移動触媒としては、Ｐｏｌｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００３），７７（５），５７７〜５９０に記載されている手順に従って生成させることのできる［Ｎ（Ｅ）］−Ｎ−（フェニルメチレン）アセトアミドが挙げられるが、これに限定されない。]
[0141] 好適なチアジアゾールジオキシド酸素移動触媒としては、米国特許第５，７５３，５９９号（９段落目、実施例２）に記載されている手順に従って生成させることのできる３−メチル−４−フェニル−１，２，５−チアジアゾール１，１−ジオキシドが挙げられるが、これに限定されない。]
[0142] 好適なペルフルオロイミン酸素移動触媒としては、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ（１９９４），３５（３４），６３２９〜３０に記載されている手順に従って生成させることのできる（Ｚ）−２，２，３，３，４，４，４−ヘプタフルオロ−Ｎ−（ノナフルオロブチル）ブタンイミドイルフルオリドが挙げられるが、これに限定されない。]
[0143] 好適な環状糖ケトン酸素移動触媒としては、米国特許第６，６４９，０８５号（１２段落目、実施例１）において調製されるような１，２：４，５−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−Ｄ−エリトロ−２，３−ヘキソジウロ−２，６−ピラノースが挙げられるが、これに限定されない。]
[0144] 好ましくは、漂白触媒はイミニウム及び／又はカルボニル官能基を含み、及び典型的には、酸素原子を受け取ると、とりわけペルオキシ酸及び／又はその塩から酸素原子を受け取ると、オキサジリジニウム及び／又はジオキシラン官能基を形成することができる。好ましくは、漂白触媒はオキサジリジニウム官能基を含み、及び／又は酸素原子を受け取ると、とりわけペルオキシ酸及び／又はその塩から酸素原子を受け取ると、オキサジリジニウム官能基を形成することができる。好ましくは、漂白触媒は環状イミニウム官能基を含み、好ましくはその場合、環状部分の環のサイズは、原子５〜８個（窒素原子も包含して）、好ましくは原子６個である。好ましくは、漂白触媒は、アリールイミニウム官能基、好ましくは２環状アリールイミニウム官能基、好ましくは３，４−ジヒドロイソキノリニウム官能基を含む。典型的にはイミン官能基は４級イミン官能基であり、典型的には、酸素原子を受け取ると、とりわけペルオキシ酸及び／又はその塩から酸素原子を受け取ると、４級オキサジリジニウム官能基を形成することができる。]
[0145] 好ましくは、漂白触媒は次の化学式に相当する化学構造を有する。



式中、ｎ及びｍは０〜４から独立して選択され、好ましくはｎ及びｍは両方とも０で、それぞれのＲ１は水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、溶融アリール、複素環、溶融複素環、ニトロ、ハロ、シアノ、スルホナート、アルコキシ、ケト、カルボン酸、及びカルボアルコキシラジカルからなる群から選択された置換型又は非置換型ラジカルから独立して選択され；任意の２つの隣接Ｒ１置換基を組み合わせて溶融アリール、溶融炭素環、又は溶融複素環を形成することができ；それぞれのＲ２は水素、ヒドロキシ、アルキル、シクロアルキル、アルカリル、アリール、アラルキル、アルキレン、複素環、アルコキシ、アリールカルボニル基、カルボキシアルキル基、及びアミド基からなる群から独立して選択された置換型又は非置換型ラジカルから独立して選択され；任意のＲ２は任意の他のＲ２と結合して共通環の一部を形成してよく；任意のジェミナルＲ２は結合してカルボニルを形成してよく；任意の２つのＲ２は結合して置換型又は非置換型の溶融不飽和部分を形成してよく；Ｒ３はＣ１〜Ｃ２０の置換型又は非置換型アルキルであり；Ｒ４は水素又は部分Ｑｔ−Ａで、Ｑは分枝又は非分枝アルキレン、ｔは０又は１、及びＡは、ＯＳＯ３−、ＳＯ３−、ＣＯ２−、ＯＣＯ２−、ＯＰＯ３２−、ＯＰＯ３Ｈ−及びＯＰＯ２−からなる群から選択されるアニオン基であり；Ｒ５は水素、又は部分−ＣＲ１１Ｒ１２−Ｙ−Ｇｂ−Ｙｃ−［（ＣＲ９Ｒ１０）ｙ−Ｏ］ｋ−Ｒ８で、式中、それぞれのＹはＯ、Ｓ、Ｎ−Ｈ、又はＮ−Ｒ８からなる群から独立して選択され；それぞれのＲ８はアルキル、アリール、及びヘテロアリールからなる群から独立して選択され、前記部分は置換されるか非置換であり、置換、非置換に関わらず前記部分は２１未満の炭素を有し；それぞれのＧはＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ、ＰＯ及びＰＯ２からなる群から独立して選択され；Ｒ９及びＲ１０はＨ及びＣ１〜Ｃ４アルキルからなる群から独立して選択され；Ｒ１１及びＲ１２はＨ、及びアルキルからなる群から独立して選択され、又は一緒に使用した場合は結合してカルボニルを形成してよく；ｂは０又は１で、ｃは０又は１であってよく、しかしｃはｂが０のときは０でなければならなず；ｙは１〜６の整数で；ｋは０〜２０の整数で；Ｒ６はＨ又はアルキル、アリール、又はヘテロアリール部分で；前記部分は置換されるか、又は非置換で；Ｘは（存在する場合）好適な荷電平衡対イオンで、好ましくはＸはＲ４が水素の場合に存在し、好適なＸは塩化物、ブロマイド、スルフェート、メトスルフェート、ｐ−トルエンスルホネート、ボロンテトラフルオリド、フォスフェートを含むが、これらに限定されない。]
[0146] 本発明の１つの実施形態では、漂白触媒は、以下の一般式に相当する構造を有する。



式中、Ｒ１３は、３〜２４個の炭素原子（分枝炭素原子を包含）を含有する分枝状アルキル基、又は１〜２４個の炭素原子を含有する直鎖アルキル基であり、好ましくは、Ｒ１３は、８〜１８個の炭素原子を含有する分枝状アルキル基、又は８〜１８個の炭素原子を含む直鎖アルキル基であり、好ましくは、Ｒ１３は、２−プロピルヘプチル、２−ブチルオクチル、２−ペンチルノニル、２−ヘキシルデシル、ｎ−ドデシル、ｎ−テトラデシル、ｎ−ヘキサデシル、ｎ−オクタデシル、イソノニル、イソデシル、イソトリデシル、及びイソペンタデシルからなる群から選択され、好ましくは、Ｒ１３は、２−ブチルオクチル、２−ペンチルノニル、２−ヘキシルデシル、イソトリデシル、及びイソペンタデシルからなる群から選択される。]
[0147] グリコシル加水分解酵素−グリコシル加水分解酵素は、典型的にキシログルカン及びアモルファスセルロース基質の両方に対する酵素活性を有する。好ましくは、グリコシル加水分解酵素は、ＧＨファミリー５、１２、４４又は７４から選択される。]
[0148] キシログルカンに対する酵素活性は、下記に詳しく記述される。非晶質セルロース基質に対する酵素活性は、下記に詳しく記述される。]
[0149] グリコシル加水分解酵素は好ましくは、グリコシル加水分解酵素ファミリー４４に属する。グリコシル加水分解酵素（ＧＨ）ファミリーの定義は、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．１９９１，ｖ２８０，３０９〜３１６により詳しく記述されている。]
[0150] グリコシル加水分解酵素は好ましくは、少なくとも７０％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、配列Ｎｏ．１と同一の配列を有する。]
[0151] 本発明の目的上、２つのアミノ酸配列間の同一性の度合は、エンボスパッケージ（ＥＭＢＯＳＳ：Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｏｐｅｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｓｕｉｔｅ，Ｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｔｒｅｎｄｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６：２７６〜２７７）のニードプログラムで実施されているニードルマン−ブンシュアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３〜４５３）の、好ましくはバージョン３．０．０以降を使って決定される。使用される所望によるパラメータは、ギャップ開始ペナルティが１０、ギャップ伸長ペナルティが０．５、ＥＢＬＯＳＵＭ６２（ＥＭＢＯＳＳバージョンＢＬＯＳＵＭ６２）置換マトリックスである。「最長同一（longest identity）」と標識されたＮｅｅｄｌｅ出力（−ｎｏｂｒｉｅｆオプションを使用して得られる）が、同一性パーセントとして使用され、次のように計算される。（同一残基×１００）／（アライメント長さ−アライメント中のギャップの合計数）。]
[0152] 好適なグリコシル加水分解酵素は、パエニバチルス・ポリザイマ（polyzyma）（野生型）から得られた国際公開特許第ＷＯ０１／０６２９０３号に記載されているＸＹＧ１００６などのＧＨファミリー４４グリコシル加水分解酵素又はその変異体、バチルス・リケニフォルミス（野生型）から得られた国際公開特許第ＷＯ９９／０２６６３号に記載されている配列番号１などのＧＨファミリー１２グリコシル加水分解酵素又はその変異体、バチルス・アガラドヘレンス（野生型）から得られたＧＨファミリー５グリコシル加水分解酵素又はその変異体、パエニバチルス（野生型）から得られた国際公開特許第ＷＯ０１／０６４８５３号に記載されているＸＹＧ１０３４及びＸＹＧ１０２２などのＧＨファミリー５グリコシル加水分解酵素又はその変異体、ジョネシアｓｐ．（野生型）から得られた国際公開特許第ＷＯ２００２／０７７２４２号に記載されているＸＹＧ１０２０などのＧＨファミリー７４グリコシル加水分解酵素又はその変異体、並びにトリコデルマ・リーセイ（野生型）から得られた国際公開特許第ＷＯ０３／０８９５９８号の配列番号２に、より詳細に記載された酵素などのＧＨファミリー７４グリコシル加水分解酵素又はその変異体からなる群から選択される。]
[0153] 好ましいグリコシル加水分解酵素は、パエニバチルス・ポリキシマ（野生型）から得られたＸＹＧ１００６などのＧＨファミリー４４グリコシル加水分解酵素からなる群から選択されるか、又はその変異型である。]
[0154] キシログルカン基質に対するグリコシル加水分解酵素活性
ｐＨ７．５において下記のアッセイに従い、純粋な酵素が５００００ＸｙｌｏＵ／ｇを超える特異的活性を有している場合、その酵素はキシログルカンに対して活性を有していると見なされる。]
[0155] キシログルカナーゼ活性は、Ｍｅｇａｚｙｍｅ（アイルランド）から入手したＡＺＣＬ−キシログルカンを基質（青色基質）として使用して測定する。]
[0156] 青色基質の０．２％溶液は、１．５ｍＬのエッペンドルフ試験管（それぞれに０．７５ｍＬ）で攪拌しながら０．１Ｍのリン酸塩緩衝剤ｐＨ７．５、２０℃でけん濁され、５０マイクロリットルの酵素溶液が追加され、それらはエッペンドルフサーモミキサーで４０℃で２０分、１２００ｒｐｍのミキシングによって培養される。培養後、着色溶液は１４，０００ｒｐｍで４分の遠心分離によって固体から分離され、上清の吸光度を分光測光器を使って１ｃｍのキュベット内で６００ｎｍで測定する。ＸｙｌｏＵ単位は、６００ｎｍにおいて１ｃｍキュベット内で０．２４の吸光度をもたらす酵素の量として定義される。]
[0157] ＸｙｌｏＵ活性の計算には、０．１〜０．８の吸光度値のみが使用される。吸光度値の測定値がこの範囲外となった場合、これに応じて最初の酵素濃度の最適化を行うべきである。]
[0158] 非晶質セルロース基質に対するグリコシル加水分解酵素活性
ｐＨ７．５において下記のアッセイに従い、純粋な酵素が２００００ＥＢＧ／ｇを超える特異的活性を有している場合、その酵素は非晶質セルロースに対して活性を有していると見なされる。緩衝剤として用いる化学物質及び基質は、少なくとも試薬等級の市販製品であった。]
[0159] エンドグルカナーゼ活性アッセイの材料：
０．１Ｍリン酸塩緩衝液、ｐＨ７．５
Ｃｅｌｌａｚｙｍｅ Ｃ錠剤（アイルランドのＭｅｇａｚｙｍｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌより入手）。]
[0160] ガラスマイクロファイバーフィルター、ＧＦ／Ｃ、直径９ｃｍ（Ｗｈａｔｍａｎより入手）。]
[0161] 方法：
試験管中で、１ｍＬのｐＨ７．５緩衝液と５ｍＬの脱イオン水を混合する。]
[0162] １００マイクロリットルの酵素試料（又は酵素試料を既知の重量：重量希釈率で希釈したもの）を加える。各試験管にＣｅｌｌａｚｙｍｅ Ｃ錠剤を１錠加え、試験管にキャップをして、ボルテックスミキサーで１０秒間混合する。この試験管を、温度４０℃のサーモスタット付き水浴に入れる。１５分後、３０分後及び４５分後に、試験管を転倒混和することにより試験管の内容物を混合し、水浴に戻す。６０分後、試験管の内容物を転倒混和し、次にＧＦ／Ｃフィルターで濾過する。この濾液をきれいな試験管に回収する。]
[0163] 分光光度計を用い、吸光度（Ａｅｎｚ）を５９０ｎｍで測定する。ブランク値（Ａｗａｔｅｒ）は、マイクロリットルの酵素試料の代わりに１００μＬの水を加えることにより決定される。]
[0164] Ａｄｅｌｔａ＝Ａｅｎｚ−Ａｗａｔｅｒを計算する。]
[0165] Ａｄｅｌｔａは＜０．５でなければならない。これより高い値が得られた場合は、異なる酵素希釈率で繰り返す。]
[0166] ＤＦＯ．１を決定する（ＤＦＯ．１は、Ａｄｅｌｔａ＝０．１を得るのに必要な希釈率である）。]
[0167] 単位の定義：１エンドβグルカナーゼ活性単位（１ＥＢＧ）は、上述のアッセイ条件において、Ａｄｅｌｔａ＝０．１０を得る酵素量である。よって例えば、所定の酵素試料を、希釈率１００で希釈後にＡｄｅｌｔａ＝０．１０を得た場合、その酵素試料は１００ＥＢＧ／ｇの活性を有する。]
[0168] 両親媒性アルコキシル化グリース洗浄ポリマー−本発明の両親媒性アルコキシル化グリース洗浄ポリマーは、布帛及び表面からグリース粒子を除去するように親水性と疎水性の特性が釣り合っている任意のアルコキシル化ポリマーを示す。本発明の両親媒性アルコキシル化グリース洗浄ポリマーの具体的な実施形態は、コア構造とそのコア構造に結合した複数のアルコキシレート基とを含む。]
[0169] コア構造は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）：



の繰り返し単位を縮合形態で含むポリアルキレンイミン構造（式中、＃は、各場合において、窒素原子と式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の２つの隣接する繰り返し単位のＡ１基の遊離結合部位との間の結合の半分を示し、＊は、各場合において、アルコキシレート基のうちの１つに対する結合の半分を示し、Ａ１は、直鎖又は分枝鎖のＣ２〜Ｃ６−アルキレンから独立して選択され、ポリアルキレンイミン構造は、式（Ｉ）の１繰り返し単位、式（ＩＩ）のｘ繰り返し単位、式（ＩＩＩ）のｙ繰り返し単位及び式（ＩＶ）のｙ＋１繰り返し単位からなり、ｘ及びｙは、各場合において、０〜約１５０の範囲の値を有し、ポリアルキレンイミンコア構造の平均重量平均分子量Ｍｗは、約６０〜約１０，０００ｇ／ｍｏｌの範囲の値である）を含んでもよい。]
[0170] あるいは、コア構造は、式（Ｉ．ａ）及び／又は（Ｉ．ｂ）のＮ−（ヒドロキシアルキル）アミンから選択される少なくとも１つの化合物の縮合生成物のポリアルカノールアミン構造



（式中、Ａは、Ｃ１〜Ｃ６−アルキレンから独立して選択され、Ｒ１、Ｒ１＊、Ｒ２、Ｒ２＊、Ｒ３、Ｒ３＊、Ｒ４、Ｒ４＊、Ｒ５及びＲ５＊は、水素、アルキル、シクロアルキル又はアリールから独立して選択され、後者３つの言及されたラジカルは所望により置換されてもよく、Ｒ６は、水素、アルキル、シクロアルキル又はアリールから選択され、後者３つの言及されたラジカルは所望により置換されてもよい）のいずれかを含んでもよい。]
[0171] コア構造に結合した複数のアルキレンオキシ基は、式（Ｖ）のアルキレンオキシ単位



（式中、＊は、各場合において、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＶ）の繰り返し単位の窒素原子に対する結合の半分を示し、Ａ２は、各場合において、１，２−プロピレン、１，２−ブチレン及び１，２−イソブチレンから独立して選択され、Ａ３は、１，２−プロピレンであり、Ｒは、各場合において、水素及びＣ１〜Ｃ４−アルキルから独立して選択され、ｍは０〜約２の範囲の平均値を有し、ｎは約２０〜約５０の範囲の平均値を有し、ｐは約１０〜約５０の範囲の平均値を有する）から独立して選択される。]
[0172] 両親媒性アルコキシル化グリース洗浄ポリマーの特定の実施形態は、内側ポリエチレンオキシドブロックと外側ポリプロピレンオキシドブロックとを有するアルコキシル化ポリアルキレンイミンから選択されてもよく、エトキシル化度及びプロポキシル化度は特定の制限値を上回りも下回りもしない。本発明によるアルコキシル化ポリアルキレンイミンの特定の実施形態は、ポリエチレンブロックのポリプロピレンブロックに対する比率（ｎ／ｐ）の最小値が約０．６であり、最大値が約１．５（ｘ＋２ｙ＋１）１／２である。約０．８〜約１．２（ｘ＋２ｙ＋１）１／２のｎ／ｐ比率を有するアルコキシル化ポリアルキレンイミンは、特に有益な特性を有することが判明している。]
[0173] 本発明によるアルコキシル化ポリアルキレンイミンは第１級、第２級及び第三級アミン窒素原子からなる主鎖を有し、これらの窒素原子はアルキレンラジカルＡにより互いに結合し、ランダムに配列される。ポリアルキレンイミン主鎖の主鎖及び側鎖を開始又は終止し、その残りの水素原子が引き続いてアルキレンオキシ単位により置換される第１級アミノ部分は、それぞれ式（Ｉ）又は（ＩＶ）の繰り返し単位と呼ばれる。残りの水素原子が引き続いてアルキレンオキシ単位により置換される第２級アミノ部分は、式（ＩＩ）の繰り返し単位と呼ばれる。主鎖と側鎖に分枝する第三級アミノ部分は、式（ＩＩＩ）の繰り返し単位と呼ばれる。]
[0174] 環化がポリアルキレンイミン主鎖の形成時に生じ得るので、環状アミノ部分が主鎖内に僅かな程度まで存在することも可能である。環状アミノ部分を含有するこのようなポリアルキレンイミンは無論、非環状第１級及び第２級アミノ部分からなるものと同様にアルコキシル化される。]
[0175] 窒素原子及びＡ１基からなるポリアルキレンイミン主鎖は、約６０〜約１０，０００ｇ／モル、好ましくは約１００〜約８，０００ｇ／モル、より好ましくは約５００〜約６，０００ｇ／モルの平均分子量Ｍｗを有する。]
[0176] 和（ｘ＋２ｙ＋１）は、１つの個々のポリアルキレンイミン主鎖内に存在するアルキレンイミン単位の総数に相当し、それゆえにポリアルキレンイミン主鎖の分子量に直接関わる。しかしながら、指定で与えられた値は、混合物中に存在する全てのポリアルキレンイミンの数平均に関わる。和（ｘ＋２ｙ＋２）は、１つの個々のポリアルキレンイミン主鎖内に存在するアミノ基の総数に相当する。]
[0177] アミノ窒素原子に接続するラジカルＡ１は、１，２−エチレン、１，２−プロピレン、１，２−ブチレン、１，２−イソブチレン、１，２−ペンタンジイル、１，２−ヘキサンジイル又はヘキサメチレンなどの、同一又は異なる、直鎖又は分枝鎖Ｃ２〜Ｃ６−アルキレンラジカルであり得る。好ましい分枝状アルキレンは、１，２−プロピレンである。好ましい直鎖アルキレンは、エチレン及びヘキサメチレンである。より好ましいアルキレンは、１，２−エチレンである。]
[0178] ポリアルキレンイミン主鎖の第１級及び第２級アミノ基の水素原子は、式（Ｖ）のアルキレンオキシ単位により置換される。



この式では、変数は好ましくは、以下に与えられる意味のうちの１つを有する。
Ａ２は、各場合において、１，２−プロピレン、１，２−ブチレン及び１，２−イソブチレンから選択され、好ましくはＡ２は１，２−プロピレンである。Ａ３は１，２−プロピレンであり、Ｒは、各場合において、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル（メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル及びｔｅｒｔ−ブチルなど）から選択され、好ましくはＲは水素である。添え字ｍは、各場合において、０〜約２の値を有し、好ましくはｍは０又はおよそ１であり、より好ましくはｍは０である。添え字ｎは、約２０〜約５０の範囲、好ましくは約２２〜約４０の範囲、より好ましくは約２４〜約３０の範囲の平均値を有する。添え字ｐは、約１０〜約５０の範囲、好ましくは約１１〜約４０の範囲、より好ましくは約１２〜約３０の範囲の平均値を有する。]
[0179] 好ましくは、式（Ｖ）のアルキレンオキシ単位は、アルコキシレートブロックの非ランダム配列である。非ランダム配列により、［−Ａ２−Ｏ−］ｍが１番目に付加され（すなわち、式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の繰り返し単位の窒素原子に対する結合に最も近接している）、［−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−］ｎが２番目に付加され、［−Ａ３−Ｏ−］ｐが３番目に付加されることが意味される。この配向は、内側ポリエチレンオキシドブロックと外側ポリプロピレンオキシドブロックとを有するアルコキシル化ポリアルキレンイミンを提供する。]
[0180] 式（Ｖ）のこれらのアルキレンオキシ単位のかなりの部分は、エチレンオキシ単位−［ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）］ｎ−及びプロピレンオキシ単位−［ＣＨ２−ＣＨ２（ＣＨ３）−Ｏ］ｐ−により形成される。アルキレンオキシ単位はまた追加的に、小さな比率のプロピレンオキシ又はブチレンオキシ単位−［Ａ２−Ｏ］ｍ−を有してもよく、すなわち、水素原子で飽和したポリアルキレンイミン主鎖は、存在するＮＨ−部分１モル当たりで最大約２モル、特に約０．５〜約１．５モル、特に約０．８〜約１．２モルの、少量のプロピレンオキシド又はブチレンオキシドと最初に反応させてもよい、すなわち、初期にアルコキシル化させてもよい。]
[0181] ポリアルキレンイミン主鎖のこの最初の修飾により、必要である場合には、アルコキシル化における反応混合物の粘性を低下させることができる。しかしながら、修飾は一般にアルコキシル化ポリアルキレンイミンの性能特性に影響せず、したがって、好ましい尺度を構成しない。]
[0182] 両親媒性アルコキシル化グリース洗浄ポリマーは、本発明の洗剤及び洗浄組成物中に、組成物の約０．０５重量％〜約１０重量％の範囲の濃度で存在する。本組成物の実施形態は、約０．１重量％〜約５重量％を含んでもよい。より具体的には、本実施形態は、約０．２５〜約２．５％のグリース洗浄ポリマーを含んでもよい。]
[0183] ランダムグラフコポリマー−ランダムグラフトコポリマーは、（ｉ）不飽和Ｃ１〜Ｃ６カルボン酸、エーテル、アルコール、アルデヒド、ケトン、エステル、糖単位ユニット、アルコキシ単位、無水マレイン、飽和ポリアルコール（例えばグリセロールなど）、及びこれらの混合物からなる群から選択されるモノマーを含む親水性主鎖、並びに（ｉｉ）Ｃ４〜Ｃ２５アルキル基、ポリプロピレン、ポリブチレン、飽和Ｃ１〜Ｃ６モノカルボン酸のビニルエステル、アクリル酸又はメタクリル酸のＣ１〜Ｃ６アルキルエステル、及びこれらの混合物からなる群から選択される疎水性側鎖を含む。]
[0184] このポリマーは好ましくは、次の一般式を有する：



式中、Ｘ、Ｙ及びＺは、Ｈ又はＣ１〜６アルキルから独立に選択される末端保護単位であり、各Ｒ１はメチル及びエチルから独立に選択され；各Ｒ２はＨ及びメチルから独立に選択され；各Ｒ３は独立にＣ１〜４アルキルであり、並びに各Ｒ４はピロリドン及びフェニル基から独立に選択される。ポリエチレンオキシド主鎖の重量平均分子量は典型的に、約１，０００ｇ／ｍｏｌ〜約１８，０００ｇ／ｍｏｌ、又は約３，０００ｇ／ｍｏｌ〜約１３，５００ｇ／ｍｏｌ、又は約４，０００ｇ／ｍｏｌ〜約９，０００ｇ／ｍｏｌである。ｍ、ｎ、ｏ、ｐ及びｑの値は、ペンダント基が少なくとも５０％、又は約５０％〜約９８％、又は約５５％〜約９５％、又は約６０％〜９０％のポリマーの重量を含むように選択される。本明細書で有用なポリマーは典型的に、約１，０００〜約１００，０００ｇ／ｍｏｌ、又は好ましくは約２，５００ｇ／ｍｏｌ〜約４５，０００ｇ／ｍｏｌ、又は約７，５００ｇ／ｍｏｌ〜約３３，８００ｇ／ｍｏｌ、又は約１０，０００ｇ／ｍｏｌ〜約２２，５００ｇ／ｍｏｌの重量平均分子量を有する。]
[0185] 好適なグラフトコポリマーについては、国際公開特許第ＷＯ０７／１３８０５４号、同第ＷＯ０６／１０８８５６号、及び同第ＷＯ０６／１１３３１４号に詳しく記述されている。]
[0186] 予備アルカリ度−組成物は４．０を超える、好ましくは７．５を超える予備アルカリ度を有してよい。本明細書で使用するとき、「予備アルカリ度」という用語は、洗剤組成物の１％（重量／容量）溶液を塩酸によってｐＨ７．５まで（すなわち、以下で定義する様な予備アルカリ度を計算するために）滴定することによって決定される、洗剤組成物（ｇ／ＮａＯＨ／１００ｇ洗剤組成物）の緩衝能の尺度である。]
[0187] ｇＮａＯＨ／１００ｇ製品の％アルカリとしての予備アルカリ度（ｐＨ７．５まで）＝（Ｔ×Ｍ×４０×容積）／（１０×重量×アリコート）
Ｔ＝ｐＨ７．５までの滴定量（ｍＬ）
Ｍ＝ＨＣｌのモル濃度＝０．２
４０＝ＮａＯＨの分子量
Ｖｏｌ＝総容積（例：１０００ｍＬ）
Ｗ＝製品重量（１０ｇ）
アリコート＝（１００ｍＬ）]
[0188] 完全に配合された洗剤組成物の試料１０ｇを小数点第二位まで正確に量り取る。試料は、ダストキャビネット内でパスカルサンプラー（Pascall sampler）を使用して取り分ける必要がある。１０ｇの試料をプラスチック製ビーカーに加え、２００ｍＬの二酸化炭素フリーの脱イオン水を加える。攪拌用プレート上で磁性攪拌器を使用し、完全に溶解するまで少なくとも１５分間１５０ｒｐｍで攪拌する。ビーカーの内容物を、１リットルのメスフラスコに移動し、脱イオン水で１リットルにする。十分に混同し、１００ｍＬピペットを使用して、１００ｍＬ＊１ｍＬのアリコートを直ちに取る。±０．０１ｐＨ単位まで読み取り可能なｐＨ計を使用して、攪拌しながら、温度を２１℃±２℃に確保しつつ、試料のｐＨ及び温度を測定及び記録する。撹拌しながら、ｐＨの測定値が正確に７．５になるまで０．２Ｍ塩酸で滴定する。使用した塩酸のミリリットル数を記録する。同様に３回繰り返した平均滴定量を採用する。前述した計算を行い、ｐＨ７．５にするためのＲＡを計算する。]
[0189] 発明の洗剤組成物のＲＡは、７．５より大きく、好ましくは８より大きい。前記ＲＡは、９より大きくてもよく、又は更に９．５より大きくても、又は１０以上でもよい。前記ＲＡは、２０以下又はそれ以上であってもよい。]
[0190] 例えば、１つ以上のアルカリ金属ケイ酸塩類（結晶性層状ケイ酸塩を除く）、典型的に非晶質ケイ酸塩類、一般的に１．２〜２．２比のナトリウム塩、アルカリ金属（典型的には、炭酸ナトリウム、重炭酸塩及び／又はセスキ炭酸塩類）によって、適切な予備アルカリ度が提供されてもよい。ＳＴＰＰ及び過ホウ酸塩類及び過炭酸塩などの過酸基塩類も、アルカリ性に寄与する。汚れの酸性度、特にリパーゼ酵素によって遊離された脂肪酸に対抗しつつ、アルカリ性ｐＨを前記洗浄工程中に維持するためには、緩衝が必要である。]
[0191] 香料−組成物は香料を含んてよい。香料は、例えばデンプンなどによって封入してよい。香料は、尿素ホルムアルデヒド、又はメラミン−ホルムアルデヒド材料によって封入してよい。これらの香料封入は、香料マイクロカプセルの形態であってよい。]
[0192] 組成物は、カプセル封入された香料及びカプセル封入されない香料を含んでよく、カプセル封入された香料内に存在する一般構造式（Ｒ１Ｒ２Ｒ３ＣＣ（Ｏ）ＯＲ４（ここで、Ｒ１Ｒ２Ｒ３はそれぞれＨ、アルキル、アリール、アルキルアリール、環状アルキルから独立して選択され、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つのＲ１Ｒ２Ｒ３がＨである）を有する香料原料材料と、それと同じ一般構造式を有するカプセル封入されていない香料の重量比が３：１より大きく、好ましくは４：１より大きく、又は更に５：１より大きく、又は１０：１、又は１５：１又は更に２０：１より大きくさえある。]
[0193] 上記の一般構造式を有する典型的な香料の原材料としては、ベンジルアセテート、ヘキシルアセテート、アリルカプロエート、ゲラニルブチラート、ゲラニルアセテートエチルブチラート、ネリルブチラート、シトロネリルアセテート、エチルｌ−２−メチルペンタノエート、イソプロピル２−メチルブチラート、及びアリルアミルグリコレートが挙げられる。上記の一般構造式を有する香料原材料としては、英国ケント、アッシュフォードのＱｕｅｓｔが提供するマンザナート（商標）；及び米国ニュージャージー州のＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｌａｖｏｒｓ ａｎｄ Ｆｒａｇｒａｎｃｅｓが提供するベルテネックス（商標）、ヴェルドックス（商標）、バイオリッフ（商標）が挙げられる。]
[0194] 組成物は香料を含んでよく、香料は０超過３５０ダルトン以下の分子量を有する１つ以上の香料原材料の少なくとも１０重量％を含み、少なくとも８０重量％の前記１つ以上の香料原材料が少なくとも２．４のｃＬｏｇＰを有し、前記香料組成物が少なくとも２．４のｃＬｏｇＰを有する前記１つ以上の香料成分の５重量％を含む。]
[0195] 本明細書で開示する香料組成物は、臭気、特に脂肪酸臭、より具体的には短鎖脂肪酸臭（酪酸臭など）をマスキングするのに特に有用であり、当該香料組成物は特に洗剤粉末内で有用である。]
[0196] 発明の１つの態様では、前記香料が、０超過３５０ダルトン以下、約１００ダルトン〜約３５０ダルトン、約１３０ダルトン〜２７０ダルトン、又は更に約１４０ダルトン〜約２３０ダルトンの分子量を有する、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は更に９０％の１以上の香料原材料を含み、前記１以上の香料原材料の少なくとも８０％、８５％、９０％又は更に９５％が、少なくとも２．４、約２．７５〜約８．０、又は更には約２．９〜約６．０のＣｌｏｇＰを有し、前記香料が、少なくとも２．４、約２．７〜約８・０、又は更に約２．９〜約６．０の範囲内のＣｌｏｇＰを有する、前記１以上の香料成分の少なくとも５％、１５％、２５％、３５％、４５％、５５％、６５％、７５％、８５％、又は更に９５％含む。本発明の前記態様では、前記１以上の香料成分は、シッフ塩基、エーテル、フェノール、ケトン、アルコール、エステル、ラクトン、アルデヒド、ニトリル、天然油又はこれらの混合物からなる群から選択されてよい。]
[0197] 洗浄方法
本発明は、ある場所、とりわけ表面又は布帛を洗浄及び／又は処理する方法を含む。それらの方法は、本出願人の洗浄組成物の実施形態を、希釈していない形態で、又は洗浄溶液中で希釈して、表面又は布帛の少なくとも一部分に接触させ、その後、所望により、表面又は布帛をすすぐ工程を含む。表面又は布帛は前述のすすぎ工程の前に洗浄工程を経てもよい。本発明の目的上、洗浄には、擦ること及び機械的攪拌が挙げられるが、これらに限定されない。当業者に理解されるように、本発明の洗浄組成物は理想的には洗濯用途に用いるのに適している。それゆえに、本発明は布帛を洗濯するための方法を含む。この方法は、洗濯されるべき布帛を本出願の洗浄組成物の少なくとも１つの実施形態、洗浄添加剤又はこれらの混合物を含む洗浄洗濯溶液と接触させる工程を含む。布帛は、標準的な消費者の使用条件で洗濯され得る大抵の任意の布帛を含んでもよい。溶液のｐＨは約８〜約１０．５であるのが好ましい。組成物は、溶液中に約１００ｐｐｍ〜、好ましくは５００ｐｐｍ〜約１５，０００ｐｐｍの濃度で使用してよい。水温は典型的には、約５℃〜約９０℃の範囲である。本発明は、低い水温、例えば３０℃未満又は２５℃若しくは２０℃未満のような低い水温にて特に有益な場合がある。水対布帛の比率は典型的には、約１：１〜約３０：１である。]
[0198] 本発明は更に以下の例によって説明されるが、これは本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。]
[0199] 緩衝剤として用いる化学物質及び基質は、少なくとも試薬等級の市販製品であった。]
[0200] 例１−リパーゼ変異体の発現
脂肪分解酵素変異体をコード化する遺伝子を含むプラスミドを構築し、当該技術分野で標準的な方法を用いて好適な宿主細胞にトランスフォームする。]
[0201] 例２−リパーゼ変異体の生産
３４℃の一定の媒質温度と１．２リットルの開始容量を用いて、フェッドバッチ発酵として発酵を行う。媒質の初期ｐＨは６．５に設定する。ｐＨが７．０まで上昇したら、１０％のＨ３ＰＯ４を加えることでこの値を維持する。媒質中の溶存酸素の濃度は、攪拌速度を変えるとともに、毎分１リットルの媒質当たり１．０リットルの空気という一定の通気速度を用いることによって制御する。フィードの追加速度は全てのフェッドバッチフェーズで一定のレベルに維持する。]
[0202] バッチ媒質は炭素源としてマルトースシロップ、窒素源として尿素と酵母抽出物、及び微量金属と塩の混合物を含有する。フェッドバッチ局面中に連続的に添加させるフィード物は、炭素源としてのマルトースシロップを含んでおり、その一方で、窒素の十分な供給を確保する目的で、酵母エキスと尿素を添加する。]
[0203] 脂肪分解酵素の精製は、当該技術分野において既知の標準的方法、例えば、発酵上澄のろ過、及び欧州特許第ＥＰ０８５１８１３号の実施例３に記載のような、それに続く疎水性のクロマトグラフィー及び陰イオン交換によって行われてもよい。]
[0204] 例３−脂肪分解酵素変異体の洗剤内安定性
以下の脂肪分解酵素変異体の洗剤内安定性の試験が行われ、参照脂肪分解酵素配列番号２と比較された。]
[0205] 脂肪分解酵素変異体及び参照は、グラムあたり０．０６５ｍｇの酵素タンパク質の市販洗剤の濃度で投与された。]
[0206] 洗剤及び脂肪分解酵素変異体又は参照酵素を含む試料は、トリ（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリ）緩衝剤にｐＨ＝７．７で溶解され、−１８℃及び３５℃で、それぞれ２週間及び４週間保管された。残留酵素活性は、３５℃で培養された後のリパーゼ活性を−１８℃で保管された試料のリパーゼ活性で割ることで計算した。安定性データを以下の表４に示す。６つの脂肪分解酵素変異体は、全て参照リパーゼと比較して改善された洗剤内安定性を示した。]
[0207] リパーゼ活性は、製品バレレート及びｐＮｐを生成するための基質ｐ−ニトロフェニル−バレレート（ｐＮｐ−Ｖａｌ）の加水分解を監視することよって測定した。検出波長は４０５ｎｍ、ｐＨは７．７、及び温度は３．７℃。このｐＨでエステラーゼ活性を有するリパーゼは全て、この方法で分析することができる。]
[0208] （実施例Ａ）
顆粒洗濯洗剤の形状をしている漂白洗剤組成物は、次の配合によって例示されている。]
[0209] 実施例Ａの任意の組成物は、２５００ｐｐｍ、２５℃、及び水：衣類の比２５：１の代表的な中央条件で、水中に６００〜１００００ｐｐｍの濃度で洗濯布帛に用いる。]
[0210] （実施例Ｂ）
顆粒洗濯洗剤の形状をしている漂白洗剤組成物は、次の配合によって例示されている。]
[0211] 実施例Ｂの組成物のいずれかが、水中濃度１０，０００ｐｐｍ、２０〜９０℃、及び水：布の割合５：１で布帛を洗濯するのに使用される。]
[0212] （実施例Ｃ）



＊引用数字は１００ｇ当たりの酵素量（ｍｇ）
１ 米国特許第４，５９７，８９８号に記載
２ ＢＡＳＦからの商標名ＬＵＴＥＮＳＩＴ（登録商標）及びＰＣＴ国際公開特許第０１／０５８７４号に記載されているものなどで入手可能]
実施例

[0213] 本明細書に開示されている寸法及び値は、列挙した正確な数値に厳しく制限されるものとして理解すべきではない。それよりむしろ、特に指定されない限り、各こうした寸法は、列挙された値とその値周辺の機能的に同等の範囲の両方を意味することを意図する。例えば、「４０ｍｍ」として開示された寸法は、「約４０ｍｍ」を意味することを意図する。]

权利要求:

請求項1
親脂肪分解酵素の変異体を含む洗剤組成物であって、前記変異体が、（ａ）親脂肪分解酵素と比較した際、配列番号２のアミノ酸２７、２１６、２２７、２３１、２３３及び２５６のいずれかに対応するアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を有し、（ｂ）所望により、親脂肪分解酵素よりも洗剤内安定性が高い、洗剤組成物。
請求項2
親脂肪分解酵素の前記変異体が、（ａ）アミノ酸残基２３１及び２３３を含み、かつ、親脂肪分解酵素と比較した際、配列番号２のアミノ酸２７、２１６、２２７及び２５６のいずれかに対応する少なくとも１つのアミノ酸残基の置換を含むアミノ酸配列を有し、（ｂ）所望により、親脂肪分解酵素よりも洗剤内安定性が高い、請求項１に記載の洗剤組成物。
請求項3
親脂肪分解酵素の前記変異体が、位置２３１＋２３３及び、（ａ）２７と（ｂ）２１６、又は（ｃ）２５６と、のうちの１つのアミノ酸の変化を有し、所望により、前記変異体が更に２２７を含み、その位置が配列番号２に対応する、請求項１又は２に記載の洗剤組成物。
請求項4
前記変異体が、配列番号２の２７Ｒ、２１６Ｐ、２２７Ｇ、２３１Ｒ、２３３Ｒ又は２５６Ｋの１つにあるアミノ酸残基の置換を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の洗剤組成物。
請求項5
前記変異体が、配列番号２のＤ２７Ｒ、Ｓ２１６Ｐ、Ｌ２２７Ｇ、Ｔ２３１Ｒ、Ｎ２３３Ｒ又はＰ２５６Ｋの１つにあるアミノ酸残基の置換を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の洗剤組成物。
請求項6
前記変異体が、Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｐ２５６Ｋ；Ｌ２２７Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ；Ｌ２２７Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｐ２５６Ｋ；Ｄ２７Ｒ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ；Ｄ２７Ｒ＋Ｌ２２７Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ；及びＳ２１６Ｐ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒからなる群から選択される置換を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の洗剤組成物。
請求項7
前記親脂肪分解酵素が、配列番号２と、少なくとも５０％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９６％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも１００％同一である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の洗剤組成物。
請求項8
前記親脂肪分解酵素が、サーモミセス・ラノギノサスＤＳＭ４１０９によって生産されたリパーゼであり、配列番号２のアミノ酸配列を有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の洗剤組成剤。
請求項9
前記組成物が液状である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の洗剤組成物。
請求項10
前記組成物が、（ａ）０重量％〜１０重量％ゼオライトビルダーと、（ｂ）０重量％〜１０重量％リン酸ビルダーと、（ｃ）所望により、０重量％〜５重量％ケイ酸塩と、を含み、前記組成物が、所望により７．５より大きい予備アルカリ度を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
請求項11
前記組成物が、キサンテン染料光漂白剤、光開始剤及びこれらの混合物から選択される光漂白剤を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
請求項12
前記組成物が布帛色調剤を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
請求項13
前記布帛色調剤が、ダイレクトバイオレット９、ダイレクトバイオレット９９、アシッドレッド５２、アシッドブルー８０及びこれらの混合物から選択される、請求項１２に記載の組成物。
請求項14
前記組成物が漂白触媒を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
請求項15
前記組成物が、グリコシル加水分解酵素、プロテアーゼ、アミラーゼ、オキシダーゼ及びこれらの混合物から選択される酵素を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
請求項16
前記組成物が、（ａ）両親媒性アルコキシル化グリース洗浄ポリマー；（ｂ）（ｉ）不飽和Ｃ１〜Ｃ６酸、エーテル、アルコール、アルデヒド、ケトン、エステル、糖単位ユニット、アルコキシ単位、無水マレイン酸、グリセロールなどの飽和ポリアルコール、及びこれらの混合物からなる群から選択されるモノマーを含む親水性主鎖と、（ｉｉ）Ｃ４〜Ｃ２５アルキル基、ポリプロピレン、ポリブチレン、飽和Ｃ１〜Ｃ６モノカルボン酸のビニルエステル、アクリル酸又はメタクリル酸のＣ１〜Ｃ６アルキルエステル、及びこれらの混合物からなる群から選択される疎水性側鎖と、を含むランダムグラフトコポリマー；（ｃ）次の一般構造式：ビス（（Ｃ２Ｈ５Ｏ）（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ）（ＣＨ３）−Ｎ＋−ＣｘＨ２ｘ−Ｎ＋−（ＣＨ３）−ビス（（Ｃ２Ｈ５Ｏ）（Ｃ２Ｈ４Ｏ）ｎ）（式中、ｎは２０〜３０であり、ｘは３〜８である）を有する化合物又はこの硫酸化若しくはスルホン化変異体；並びに（ｄ）これらの任意の混合物、から選択される化合物を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
請求項17
前記組成物が香料マイクロカプセルを含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
請求項18
前記組成物が、カプセル封入香料及び非カプセル封入香料を含み、前記カプセル封入香料に存在する、一般構造式：Ｒ１Ｒ２Ｒ３ＣＣ（Ｏ）ＯＲ４（ここで、Ｒ１Ｒ２Ｒ３はそれぞれ、Ｈ、アルキル、アリール、アルキルアリール、環状アルキルから独立して選択され、少なくともＲ１Ｒ２Ｒ３のいずれかの１つがＨである）を有する香料原材料と、前記非カプセル封入香料に存在する、前記一般構造式をまた有する香料原材料の重量比が、３：１よりも大きい、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
請求項19
前記カプセル封入香料が、メラミンホルムアルデヒド及び／又は尿素ホルムアルデヒドによってカプセル封入されている、請求項１８に記載の組成物。
請求項20
前記組成物が香料を含み、前記香料が、０より大きいが３５０ダルトン以下の分子量を有する１つ以上の香料原材料の少なくとも１０重量％を含み、前記１つ以上の香料原材料の少なくとも８０重量％が、少なくとも２．４のｃＬｏｇＰを有し、前記香料組成物が、少なくとも２．４のｃＬｏｇＰを有する前記１つ以上の香料成分の少なくとも５重量％を含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
請求項21
表面又は布帛の処理及び／又は洗浄方法であって、所望により前記表面又は布帛を洗う及び／又はすすぎ洗いする工程と、前記表面又は布帛を請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物と接触させる工程と、次いで所望により前記表面又は布帛を洗う及び／又はすすぎ洗いする工程と、を含む、方法。
請求項22
カルボン酸エステルの前記加水分解における、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物の使用。
請求項23
エステルの前記加水分解、合成又はエステル交換における、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物の使用。
請求項24
洗剤内安定製剤の前記製造のための、請求項１〜２０に記載の脂肪分解酵素変異体の使用。